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肝脏部分缺血/再灌注损伤对小鼠术后认知功能的影响

作　者: 邬薇薇
导　师: 李元海
学　校: 安徽医科大学
专　业: 麻醉学
关键词: 肝脏缺血/再灌注胆碱乙酰基转移酶核因子-κB 海马认知功能影响
分类号: R614
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的探讨肝脏不同时间缺血后再灌注损伤对小鼠认知功能及其海马核因子-κB(NF-κB)和胆碱乙酰基转移酶(ChAT)表达的影响。方法经水迷宫实验剔除后的昆明种小白鼠80只,清洁级,2月龄,♂,体重(20-25g),通过用无损伤动脉夹夹住肝左动脉和门静脉,制作小鼠肝实质70%缺血模型,观察被阻断区肝叶颜色由鲜红色变为暗红色,同时用BP-98A小鼠无创血压仪监测尾动脉压变化,判断缺血是否成功。试验随机分为4组,每组20只小鼠,假手术组(Sham):只打开腹膜,分离肝脏的动静脉,而未进行阻断和开放的操作;缺血20min /再灌注组(I/R1):小鼠的肝左动脉及门静脉阻断20min,随后开放再灌注30min;缺血30min /再灌注组(I/R2):小鼠的肝左动脉及门静脉阻断30min,随后开放再灌注30min;缺血40min /再灌注组(I/R3):小鼠的肝左动脉及门静脉阻断40min,随后开放再灌注30min。I/R1、I/R2、I/R3于再灌注30min后分别取血清和缺血部位的肝脏组织,检测血清及肝组织匀浆中ALT、AST变化。造模成功后抗炎治疗3天。4组小鼠对半分成每组10只分别于术后第4天和第11天行Morris水迷宫实验和避暗实验。各组小鼠于末次水迷宫实验结束后断头取脑,行海马组织切片的尼氏体染色和免疫组织化学染色,观察海马结构及测定海马NF-κB和ChAT的表达。统计学处理:采用SPSS 13.0进行统计分析,实验数据以x±s表示,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果血清和肝组织匀浆中ALT和AST的比较:与Sham组相比,I/R1、I/R2、I/R3组在缺血20min、30min、40min再灌注30min后血清和肝组织匀浆中ALT和AST活性显著升高,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。与I/R3组相比,I/R1、I/R2组血清和肝组织匀浆中ALT和AST活性显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。肝组织的形态学改变:与Sham组相比,I/R1、I/R2、I/R3组的线粒体、粗面内质网、溶酶体和核糖体改变随缺血时间的延长明显增强,其中I/R3组线粒体肿胀明显,膜破坏,有足肿和空泡变性,嵴破坏,粗面内质网较少,溶酶体和核糖体较少。水迷宫实验的比较:与Sham组相比,I/R1、I/R2组于术后第5~9天的定位航行试验中潜伏期时间高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);I/R3组于术后第5~10天的定位航行实验中潜伏期时间高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);至术后第11天时各组小鼠定位航行实验潜伏期比较差异无统计学意义。与Sham组相比,I/R3组于术后第11天的空间搜索实验中穿环次数﹑平均速度﹑中心活动路程﹑中心活动时间明显低于Sham组,差异有统计学意义(P<0.01);I/R1、I/R2组差异无统计学意义;至术后第18时各组小鼠空间搜索实验中各指标比较差异无统计学意义。避暗实验的比较:与Sham组比较,I/R1组和I/R2于术后第5~7天潜伏期及错误次数高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);I/R3组于术后第4~8天潜伏期及错误次数均高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);至术后第11天时各组小鼠潜伏期及错误次数差异无统计学意义。海马尼氏体染色:光镜下I/R3组小鼠在术后第11天空间搜索实验结束后,海马神经元尼氏体排列整齐,尼氏体数量较其它组有所减少,胞浆轻度水肿,细胞核及染色质未见明显异常;其它各组小鼠海马神经元排列整齐紧密,尼氏体清晰可见,胞浆透明,细胞核呈圆形或椭圆形,染色质分布均匀,核仁清晰,结构未见明显异常。海马CA3区免疫组织化学染色NF-κB和ChAT的表达:与Sham组比较,I/R1组、I/R2组及I/R3组差异有统计学意义(P<0.05);I/R1组与I/R2组之间比较差异无统计学意义; ChAT阳性细胞在I/R3组中表达最少,至术后第18天各组之间ChAT阳性细胞表达差异无统计学意义;NF-κB阳性细胞在I/R3组中表达最多,至术后第18天各组之间NF-κB阳性细胞表达差异无统计学意义。结论肝脏部分缺血/再灌注损伤可致小鼠术后短期认知功能障碍,认知功能障碍持续11天。肝脏部分缺血再灌注损伤后11天对小鼠海马CA3区NF-κB和ChAT的表达仍有影响。

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缩略词表 5-6摘要 6-8Abstract 8-111.引言 11-122.材料和方法 12-193 结果 19-494 讨论 49-545 结论 54参考文献 54-58附录 58-59致谢 59-60综述 60-69 参考文献 67-69

肝脏部分缺血/再灌注损伤对小鼠术后认知功能的影响

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