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RNAi技术抗呼吸道合胞病毒的实验研究

作 者: 李娜
导 师: 周燕明;崔玉霞
学 校: 遵义医学院
专 业: 儿科
关键词: 呼吸道合胞病毒 小干扰RNA 抗病毒作用 气道炎症 小鼠
分类号: R725.6
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus, RSV)是婴幼儿下呼吸道感染,特别是婴幼儿病毒性肺炎和毛细支气管炎的最重要的病原体,它是造成婴儿期住院的主要原因。迄今为止尚无针对RSV感染的可靠疫苗和治疗药物问世。RNA干扰(RNAinterference, RNAi)是由短双链诱导的同源mRNA的降解过程,已被广泛应用于抗肿瘤、抗病毒的治疗研究。目的:1.探讨小鼠RSV感染后气道炎症及免疫状态。2.研究靶向RSV-M2基因的小干扰RNA (small interference RNA, siRNA)7816在BALB/c小鼠体内的抗RSV的效应。方法:1.BALB/c小鼠随机分为2组,每组6只,经鼻腔滴入107PFU/ml的RSVA2标准病毒悬浮液50u1,显微镜观察肺组织病理学、支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)白细胞计数及ELISA方法检测BALF中细胞因子IFN-γ、IL-12和IL-10水平的变化情况,分析肺组织和气道的炎症反应及免疫状态。2.BALB/c小鼠随机分为6组,每组6只,RSV感染BALB/c小鼠后分别在感染后24及48小时给予不同剂量的siRNA 7816治疗,于感染后第三天处死小鼠,取出各组小鼠的肺组织。冰冻切片分析荧光标记siRNA7816在小鼠肺组织的分布,空斑形成试验检测各组小鼠肺组织的病毒滴度,计算出各治疗组空斑形成抑制率,RT-PCR检测小鼠肺组织RSV M2基因mRNA表达,免疫组化检测小鼠肺组织病毒抗原,显微镜观察siRNA7816治疗后肺组织病理学和BALF白细胞计数,以及ELISA方法检测BALF中细胞因子IFN-γ、IL-12和IL-10水平分析肺组织和气道炎症。结果:1.小鼠感染RSV后,肺组织病理学显示BALB/c小鼠肺组织炎症明显,BALF白细胞显著升高,分类以淋巴细胞为主;细胞因子IFN-γ、IL-12和IL-10水平升高,与空白对照组比较有显著差异性(P<0.05)。2小鼠感染RSV后,肺组织分离到病毒,病毒空斑数目和病毒滴度升高;RSV M2基因mRNA明显表达;RSV抗原免疫组化的平均光密度升高;siRNA7816治疗后,冰冻切片显示siRNA7816在BALB/c小鼠肺组织分布良好;分别给予0.5nM、1.0nM和2.0nM siRNA7816治疗后,病毒空斑形成抑制率分别为55.48%、75.74%、84.96%;小鼠肺组织RSV M2基因mRNA表达下降率分别为28.98%、54.40%、76.79%;RSV抗原平均光密度分别下降了13.43%、22.37%和28.93%;小鼠肺组织病理损害得到改善;BALF中白细胞总数、淋巴细胞百分数随着siRNA7816浓度的增加而降低;BALF中细胞因子IFN-γ、IL-12和IL-10水平下降,与感染对照组比较有显著差异性(P<0.05);各治疗组间两两比较,2.0nMsiRNA7816治疗量效果更佳;负性对照组与感染对照组比较没有显著性差异(P>0.05)。结论:1.RSV经鼻腔感染BALB/c小鼠后,病毒在小鼠肺组织内能有效复制;2.RSV经鼻腔感染BALB/c小鼠后,可引起肺组织和支气管炎症反应,应用siRNA7816能够减轻RSV感染所致的气道炎症;3.siRNA7816能够有效的抑制肺组织RSV复制;4.siRNA7816能特异性的抑制RSV复制。

全文目录


英汉缩略词对照表  6-8中文摘要  8-10Abstract  10-12第一部分:呼吸道合胞病毒感染小鼠气道炎症及免疫状态的研究  12-24  前言  12-13  材料  13-15  方法  15-16  结果  16-19  讨论  19-21  结论  21-22  参考文献  22-24第二部分:RNAi技术抗呼吸道合胞病毒效应的研究  24-62  前言  24-27  材料  27-32  方法  32-38  结果  38-50  讨论  50-55  结论  55-56  参考文献  56-62全文总结  62-63RNAi技术及抗病毒研究进展  63-73  参考文献  68-73致谢  73-75作者简介  75攻读研究生期间参与研究的项目  75

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中图分类: > 医药、卫生 > 儿科学 > 小儿内科学 > 小儿呼吸系及胸部疾病
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