学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin-6基因差异表达分析

作　者: 俞燕芳
导　师: 许雅香
学　校: 苏州大学
专　业: 特种经济动物饲养
关键词: 家蚕 Serpin-6 基因转录表达谱真核表达
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 43次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本研究以家蚕(大造)为研究材料,首先采用半定量RT-PCR方法研究了家蚕在不同发育时期经LPS(脂多糖)和Bt(苏云金杆菌,Bacillus thuringiensis)刺激后BmSerpin-6基因的转录水平变化,然后研究了家蚕从幼虫到成虫整个发育过程中不同阶段BmSerpin-6基因的转录水平变化,最后采用Bac-to-Bac系统表达了BmSerpin-6蛋白,主要研究结果如下:(一)不同龄期的BmSerpin-6在经过两种刺激物免疫刺激后转录水平都呈先上升后下降的趋势,但转录水平上升至最高点的时间不一样:其中LPS刺激四龄眠蚕6h BmSerpin-6转录水平最高,LPS刺激五龄起蚕9h BmSerpin-6转录水平最高;Bt刺激四龄眠蚕3h BmSerpin-6转录水平最高,Bt刺激五龄起蚕6h BmSerpin-6转录水平最高,Bt刺激五龄三天蚕9h BmSerpin-6转录水平最高。实验结果进一步说明了BmSerpin-6基因与家蚕免疫相关。4龄眠蚕、5龄起蚕和5龄3天蚕受刺激后BmSerpin-6基因转录水平在前期都显著上调;同一种刺激物刺激不同发育时期的家蚕,转录水平上升至最高点的时间不一样,我们推测可能是由于不同发育时期的家蚕抗性水平不一致,受不同刺激物诱导家蚕生理代谢受影响的程度不一致。(二)BmSerpin-6基因在家蚕不同发育时期的转录水平具有明显的时空特异性:(1)在各个起蚕期BmSerpin-6转录水平无明显变化,但在眠起过程中变化显著,4龄眠蚕转录水平明显高于五龄起蚕。(2)在家蚕五龄期不同发育时间转录水平有很大差异,BmSerpin-6在5龄1-3d的转录水平很低,5龄4d转录水最低,后逐渐升高,在5龄6d达到最高。(3)在熟蚕未吐丝前BmSerpin-6转录水平很高,在吐丝开始后降到最低,随着吐丝时间的延长转录水平逐渐上升。(4)在蛹期BmSerpin-6转录水平随着化蛹时间的延长呈先上升后下降的趋势,在化蛹6d最高,化蛹13d最低。成虫期BmSerpin-6转录水平与刚化蛹时接近。(5)BmSerpin-6基因在5龄期家蚕精巢和卵巢中的转录水平均呈先下降后上升的趋势。由此看来,BmSerpin-6除了参与免疫反应,可能还具有其它生理功能。(三)采用苜蓿银蚊夜蛾Bac-to-Bac系统表达了BmSerpin-6蛋白。收集细胞进行SDS-PAGE和Western Blot分析,结果在46kD左右出现一条特异性条带,与预计融合蛋白大小相符,说明目的蛋的得到了表达。为进一步研究BmSerpin-6的功能打下了物质基础。本文通过两种诱导物刺激4龄眠蚕、5龄起蚕和五龄3d蚕,系统地研究了家蚕动态发育过程中BmSerpin-6基因的转录水平与免疫刺激的关系,实验结果说明BmSerpin-6基因转录水平受免疫刺激影响变化显著,推测BmSerpin-6参与家蚕先天性免疫;通过对家蚕整个发育过程中不同阶段BmSerpin-6基因转录水平进行研究,结果表明,BmSerpin-6除了参与调节免疫作用以外,可能还具有其它生理功能;最后通过真核表达接近天然蛋白活性的BmSerpin-6,为其功能研究提供了物质基础。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
前言  10-11
第一部分文献综述  11-23
  第一章 Serpin 丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展  11-15
    1 Serpin 概况  11
    2 Serpin 分布  11-12
    3 Serpin 结构与作用机制  12-13
    4 Serpin 功能  13-14
    5 Serpin 应用  14-15
  第二章昆虫酚氧化酶活化系统  15-18
    1 酚氧化酶在昆虫免疫中的作用  15-17
    2 酚氧化酶原激活分子机制  17-18
    3 调控PPO 级联的生化机制  18
  第三章昆虫 Serpin 分布及其功能  18-23
    1 分布  19
    2 分类  19-20
    3 功能  20-22
    4 展望  22-23
第二部分研究内容  23-54
  第一章一般材料与方法  23-34
    1 材料  23-26
    2 方法  26-33
    3 常用仪器  33-34
  第二章家蚕 Serpin-6 基因诱导表达研究  34-40
    摘要  34-35
    1 材料和方法  35-36
    2 实验结果  36-38
    3 讨论  38-40
  第三章家蚕 Serpin-6 基因的表达谱分析  40-48
    摘要  40-41
    1 材料与方法  41
    2 结果与分析  41-46
    3 讨论  46-48
  第四章家蚕 Serpin-6 基因的真核表达  48-54
    摘要  48
    1 材料与方法  48-50
    2 结果  50-52
    3 讨论  52-54
小结  54-55
参考文献  55-65
攻硕期间科研情况  65-66
附录  66-67
致谢  67-68

家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin-6基因差异表达分析

内容摘要

全文目录

相似论文