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血清miRNA定量方法的建立及其在肝相关疾病诊断中的应用

作　者: 丁佳女
导　师: 郭江峰；丁先锋
学　校: 浙江理工大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: miRNA 血清肝相关疾病分子标记物荧光定量PCR
分类号: R440
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景/目的:microRNA (miRNA)是一类长度为20—24个核苷酸的非编码小分子RNA,与靶基因3’端非编码区不完全配对,从而抑制靶基因mRNA的翻译,影响个体发育、细胞凋亡、细胞增殖和分化等生命活动,与肿瘤的发生、转移和耐药等病理进程密切相关。近年来研究发现,血清miRNA符合疾病诊断标志物的要求。miRNA在肝相关疾病中也起到重要作用。本文就血清miRNA在中毒肝损伤、肝细胞癌和乙肝病人中的差异表达进行分析。方法:采用实时荧光定量PCR技术对101例病人血清样本(分别为正常血清样本、中毒引起肝损伤病人血清、肝细胞癌病人血清和乙肝病人血清)差异表达分析。结果:首先建立了一个可靠、有效的血清miRNA定量方法。我们发现,与正常血清相比,miR-122在中毒肝损伤病人血清中呈上调趋势,且当ALT>600 U/L时,miR-122的上调倍数和ALT值之间有较好的相关性。在肝癌病人血清中ALT值和miR-122之间呈现出不规律的变化,且其中10.2%的病人血清中miR-122呈下调趋势。乙肝病人的血清中ALT值和miR-122之间也呈现出不规律的变化,且有38.9%的病人血清中miR-122呈下调趋势。结论:通过对中毒肝损伤、肝细胞癌和乙肝病人血清中miR-122的研究,提示miR-122在肝脏中发挥重要的作用,并可能参与了相关疾病的发生发展过程。扩展了我们对肝相关疾病生物学机制的了解,为今后肝相关疾病的miRNA靶向治疗提供依据。

全文目录

摘要  8-9
Abstract  9-13
插图目录  13-14
表格目录  14-15
缩略语表  15-16
第一章文献综述  16-28
  1 miRNA 概述  16-18
    1.1 miRNA 的产生  16
    1.2 miRNA 的功能  16-17
    1.3 miRNA 作用机制  17-18
    1.4 血清循环miRNA  18
  2 血清循环miRNA 与疾病诊疗  18-21
    2.1 血清循环miRNA 与肿瘤诊断  19-20
    2.2 血清循环miRNA 与产前诊断  20-21
    2.3 血清循环miRNA 与其他疾病  21
  3 血清miR-122 与肝相关疾病诊疗  21-24
  4 实时荧光定量PCR 与血清miRNA 定量  24-28
    4.1 荧光定量PCR 的概念和原理  25-26
    4.2 荧光定量PCR 类型  26-28
第二章研究内容和意义  28-30
  1 研究目的和意义  28
  2 研究的主要内容  28-29
  3 实验流程图  29-30
第三章材料与方法  30-37
  1 材料  30-31
    1.1 血清样本  30-31
    1.2 酶与试剂  31
  2 miRNA 序列和内参基因序列及引物  31
  3 反转录-荧光定量PCR（qRT-PCR）  31-32
  4 miRNA 测序分析  32-36
    4.1 PCR 产物回收  33
    4.2 连接  33-34
    4.3 重组质粒的转化  34
    4.4 重组质粒菌落PCR 验证  34-35
    4.5 重组质粒提取  35
    4.6 测序及序列比对分析  35-36
  5 数据处理及统计分析  36-37
第四章结果和分析  37-51
  1 血清miRNA 定量方法的建立  37-42
    1.1 血清miRNA qRT-PCR  37-40
    1.2 血清miRNA 测序  40-41
      1.2.1 重组子菌落PCR 验证  40-41
      1.2.2 血清miRNA 测序结果  41
    1.3 正常人血清miRNA 定量分析  41-42
  2 中毒肝损伤血清中miRNA 的差异表达  42-47
    2.1 血清miRNA 与ALT 水平的关系  42-44
    2.2 miR-122 与血清ALT 的相关性  44-45
    2.3 血清miR-122 与ALT 水平在中毒肝损伤治疗中的关系  45-47
  3 肝癌血清中miR-122 的差异表达  47-49
  4 乙肝血清中miR-122 的差异表达  49-50
  5 肝癌和乙肝病人血清ALT 值和miR-122 上调分布情况  50-51
第五章讨论  51-54
  1 血清miRNA 的定量方法  51-52
  2 miR-122 与肝相关疾病的关系  52
  3 U6 snRNA 在肝细胞癌病人血清中的表达  52-54
第六章结论  54-55
参考文献  55-64
致谢  64

血清miRNA定量方法的建立及其在肝相关疾病诊断中的应用

内容摘要

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