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大白菜离体再生体系的建立及遗传转化

作　者: 茹磊
导　师: 张鲁刚
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 蔬菜学
关键词: 大白菜 再生 遗传转化
分类号: S634.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 23次
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内容摘要


大白菜属于十字花科芸薹属白菜类蔬菜,是我国一种重要的蔬菜作物。采用基因工程将目的基因导入到大白菜内,以改良性状,为白菜遗传育种提供了新的技术。目前,根癌农杆菌介导植物遗传转化方法是最有效,应用最广的方法之一。而建立高效再生体系是利用根癌农杆菌进行遗传转化的前提。近年来,学者们在大白菜再生体系的建立方面做了大量的工作,以提高大白菜不定芽的分化率,取得了一些研究成果。但是普遍认为不同基因型之间,再生率差异很大,限制了大白菜再生体系的通用性。所以对于特定的材料,需要进行再生体系的优化。本文在大白菜高效再生体系研究的基础上,利用农杆菌介导法对细胞质雄性不育基因orf138进行遗传转化,取得以下结果:1以大白菜纯合自交系‘92S105’为试材,对激素、外植体类型、苗龄等再生因素进行了优化,结果表明:以5 d苗龄的带柄子叶作为外植体,在MS附加0.3 mg/LTDZ和0.5 mg/L NAA的再生培养基上培养,再生率最高,可达到76.19%。2在大白菜生根培养基中,添加IAA或者IBA的效果明显地高于添加NAA的效果,所以生根培养基为1/2MS附加1.0 mg/L IBA或1.0 mg/LIAA,生根率都达到100%。3在遗传转化中,研究了大白菜再生芽对抑菌抗生素及其筛选抗生素的敏感性,结果表明:用头孢噻肟钠和羧苄青霉素作为抑菌剂,均抑制不定芽的分化,但羧苄青霉素对不定芽分化影响较小,所以选择羧苄青霉素作为抑菌剂。以潮霉素作为抗生素筛选抗性芽和抗性植株的适宜浓度为5 mg/L。4对转基因植株通过GUS染色和PCR鉴定,初步得到转基因植株。

全文目录


摘要  5-6
ABSTRACT  6-9
第一章 文献综述  9-18
  1.1 十字花科植物细胞质雄性不育的类型  9
  1.2 植物雄性不育基因工程研究进展  9-11
    1.2.1 细胞质雄性不育的可能机理  9
    1.2.2 线粒体中与CMS 相关基因的克隆及其结构  9-10
    1.2.3 绒毡层与雄性不育的关系  10-11
  1.3 芸薹属蔬菜离体培养的研究  11-14
    1.3.1 基因型对不定芽再生的影响  12
    1.3.2 外植体  12-13
    1.3.3 培养基及其调节因子  13-14
    1.3.4 两步法培养  14
  1.4 芸薹属蔬菜基因工程的研究进展  14-17
    1.4.1 农杆菌介导法  14-16
    1.4.2 整株转化法  16-17
  1.5 选题的目的与意义  17-18
第二章 大白菜离体再生体系的建立  18-22
  2.1 材料和方法  18
    2.1.1 供试材料  18
    2.1.2 无菌苗的培养  18
    2.1.3 不定芽诱导  18
    2.1.4 不定芽生根与驯化移栽  18
  2.2 结果与分析  18-22
    2.2.1 植物生长调节剂种类对大白菜带柄子叶不定芽再生的影响  18-19
    2.2.2 苗龄对大白菜不定再生的影响  19
    2.2.3 外植体类型对大白菜不定再生的影响  19-20
    2.2.4 生根移栽  20-22
第三章 大白菜雄性不育基因orf138 的遗传转化  22-27
  3.1 材料与方法  22-24
    3.1.1 植物材料  22
    3.1.2 菌株质粒  22
    3.1.3 细菌培养基  22
    3.1.4 GUS 染色液配方  22
    3.1.5 菌液的保存  22
    3.1.6 遗传转化中所用培养基  22-23
    3.1.7 抗生素对大白菜带柄子叶不定芽再生的影响  23
    3.1.8 大白菜的遗传转化  23
    3.1.9 转基因植株的检测  23-24
  3.2 结果与分析  24-27
    3.2.1 抑菌抗生素对大白菜带柄子叶不定再生的影响  24-25
    3.2.2 潮霉素对大白菜带柄子叶不定芽再生的影响  25
    3.2.4 转基因植株的检测  25-26
    3.2.5 转基因植株的获得  26-27
第四章 讨论  27-28
  4.1 大白菜再生体系中的影响因素  27
  4.2 大白菜遗传转化抑菌剂的选择  27-28
第五章 结论  28-29
  5.1 大白菜离体再生体系的建立  28
  5.2 大白菜遗传转化体系的优化  28-29
参考文献  29-34
附录  34-35
缩略词  35-36
致谢  36-37
作者简介  37

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 蔬菜园艺 > 白菜类 > 大白菜
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