学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

沉默Smad4对猪卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响

作　者: 贺彧
导　师: 徐银学
学　校: 南京农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: Smad4 颗粒细胞 RNA干扰 细胞增殖 细胞周期
分类号: S828
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 26次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


颗粒细胞是卵巢中十分重要的细胞,在其发育的不同阶段合成和分泌类固醇激素及多种生长因子,并通过自分泌／旁分泌途径发挥作用。颗粒细胞的生长发育,增殖分化对卵泡发育有重要影响。TGF-β/Smad信号通路是影响颗粒细胞生长发育的重要信号通路,Smad4是该信号通路的核心下游信号转导分子,是TGF-p超家族信号由胞质传递至胞核的必需因子。Smad4基因表达异常不但影响颗粒细胞自身生长发育,还会造成卵泡发育异常,甚至发生癌变,进而影响雌性动物的生殖机能。本研究采用RNA干扰技术,设计并合成猪Smad4基因的靶向小分子干扰RNA,由LipofectamineTM RNAi Mix介导转染体外培养的猪卵巢颗粒细胞(Smad4-StealthTMRNA终浓度为13.3nM),沉默颗粒细胞的Smad4基因。应用荧光定量PCR法检测RNAi对颗粒细胞Smad4表达的抑制率,应用MTT法、流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期的变化,同时应用荧光定量PCR检测转染前后Cyclin D1、Cyclin B、Cyclin A2、Cdk1、Cdk2、Cdk4等周期相关基因的mRNA表达量的变化,以观察Smad4对颗粒细胞增殖和细胞周期的影响。研究结果如下：(1) RNAi可以有效抑制颗粒细胞Smad4基因表达。干扰36h后,Smad4基因mRNA表达量的抑制率为79.85%(P<0.01)。(2)RNAi沉默颗粒细胞Smad4表达可以明显抑制颗粒细胞增殖,干扰12h、24h、36h、48h和72h后,颗粒细胞的增殖存活率分别为空白对照组的90.6%、87.2%、84.8%、82.7%、80.9%,差异均存在统计学意义(P<0.05)。(3) RNAi沉默颗粒细胞Smad4基因表达可以阻滞细胞周期进程。流式细胞仪检测转染Smad4-StealthTM RNA36h后细胞周期变化,结果显示,G0/G1期细胞比例由平均86.84%(空白对照组)升高到92.82%(Smad4干扰组)(P<0.05),S期细胞比例由平均6.13%(空白对照组)降低到1.64%(Smad4干扰组)(P<0.05),G2/M期细胞比例变化不明显。用荧光定量PCR检测转染Smad4-StealthTM RNA对颗粒细胞Cyclin D1、Cyclin B、Cyclin A2、Cdk1、Cdk2、Cdk4等周期相关基因mRNA表达量的影响,发现转染36h后,以上几种基因的mRNA表达量分别降低到对照组的41.9%、77.3%、22.3%、64.3%、48.0%和61.1%。其中Cyclin D1、Cdk1、mRNA表达量显著低于对照组,Cdk2、Cdk4、Cyclin A2极显著低于对照组,Cyclin B差异不显著。综上所述,Smad4是影响猪卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期进程的重要基因。

全文目录


本研究资助  3-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
缩略语  10-11
第一章 文献综述  11-35
  1 颗粒细胞在卵泡发育中的作用  11-12
    1.1 颗粒细胞的生长发育  11
    1.2 颗粒细胞对卵泡发育的影响  11-12
  2 颗粒细胞的TGF-β/Smads信号通路  12-24
    2.1 TGF-β超家族成员对卵巢颗粒细胞的影响  12-16
    2.2 TGF-β超家族的信号转导  16-17
    2.3 Smads蛋白家族简介  17-21
    2.4 Smad4研究进展  21-24
  3 细胞周期与细胞增殖  24-30
    3.1 参与细胞周期调控的蛋白  25-26
    3.2 Cyclin-Cdks复合物对细胞周期的作用  26-29
    3.3 细胞周期检测点的调控  29-30
    3.4 Cyclin-Cdk复合物的调控机制  30
  4 RNA干扰技术  30-34
    4.1 RNAi作用机制  31-32
    4.2 siRNA的设计合成  32-33
    4.3 RNAi技术的应用  33-34
  5 本研究的目的和意义  34-35
第二章 实验研究  35-57
  1 材料与方法  35-47
    1.1 实验材料  35-37
    1.2 实验方法  37-47
  2 结果与分析  47-53
    2.1 RNAi对颗粒细胞Smad4表达的影响  47-48
    2.2 RNAi抑制Smad4表达对颗粒细胞增殖的影响  48-50
    2.3 RNAi抑制Smad4表达对颗粒细胞周期的影响  50-51
    2.4 RNAi抑制Smad4表达对颗粒细胞几种重要周期相关基因表达的影响  51-53
  3 讨论  53-57
    3.1 Smad4调控细胞增殖的可能作用机制  53-55
    3.2 Smad4通过细胞周期影响颗粒细胞增殖  55-57
全文结论  57-59
参考文献  59-69
附录  69-73
致谢  73

相似论文

  1. 冬凌草甲素调控周期相关蛋白抑制SGC-7901细胞增殖作用的研究,R285
  2. Pin1在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞周期的影响,R738.1
  3. 甜菜夜蛾信息素结合蛋白的表达动态及其受交配和钟基因沉默的影响,S433.4
  4. 棉铃虫NADPH-细胞色素P450还原酶基因的克隆、时空表达及RNA干扰,S435.622.3
  5. 马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因的克隆、表达分析及其dsRNA的发酵生产,S435.32
  6. 几种新型杀虫剂对马铃薯甲虫的毒力及两类靶标的分子克隆,S435.32
  7. Kisspeptin-10对鸡卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响及机制研究,S831
  8. 血管生成调节因子对性成熟小鼠卵泡及其血管发育的影响,S852.2
  9. β-catenin在猪卵巢组织中的表达以及对猪卵巢颗粒细胞凋亡及类固醇生成酶的影响,S828
  10. 沉默BMPR-IB基因对猪卵巢颗粒细胞凋亡及BMP通路相关基因表达的影响,S828
  11. 慢病毒载体介导的RNAi特异性沉默猪Myostatin基因的研究,S828
  12. Foxol对小鼠颗粒细胞凋亡的影响,S865.13
  13. 人IVF周期中短时受精方法及其临床结果的研究,R714.8
  14. MCFP对肝癌细胞生物行为学影响初步研究,R735.7
  15. Toll样受体4信号通路在脂多糖促进肺癌细胞增殖中的机制探讨,R734.2
  16. hnRNP A2/B1及p21WAF1蛋白在非小细胞肺癌中表达及意义,R734.2
  17. 血红素加氧酶介导盐诱导的番茄幼苗侧根发生及其与过氧化氢的关系,S641.2
  18. 半胱胺制剂对新生犊牛早期断奶成功率和免疫功能的影响,S823.5
  19. 灰飞虱功能基因的克隆及其RNAi致死效应,S435.112.3
  20. 组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响,S828
  21. SHH-N信号通路及其靶基因N-myc对神经干细胞增殖的影响,R329

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 猪
© 2012 www.xueweilunwen.com