学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

牛奶中乳铁蛋白含量变化及其影响因素的研究

作　者: 程金波
导　师: 王加启
学　校: 中国农业科学院
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 荷斯坦奶牛乳铁蛋白初乳常乳免疫乳单核苷酸多态性体细胞数基因表达
分类号: S823
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 227次
引　用: 8次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本试验较为系统地研究了牛奶中乳铁蛋白含量的变化规律及其影响因素,共包括以下五部分:第一部分:试验中共采集36头荷斯坦奶牛初乳奶样、利用夹心ELISA方法检测乳中乳铁蛋白的绝对含量,同时通过SDS-PAGE进行相对定量分析,来研究初乳中乳铁蛋白含量的变化规律。结果表明:初乳中乳铁蛋白含量变化较大,尤其是分娩后24 h内下降明显,从1.315 mg/mL降至0.655 mg/mL。第二部分:从北京4个奶牛场中,通过连续跟踪奶牛乳中体细胞数的变化,选择出处于正常泌乳期内,且两个月内无乳房炎临床症状的荷斯坦奶牛198头。记录奶牛的产奶量同时收集奶牛的个体样品。通过夹心ELISA方法检测乳中乳铁蛋白的含量,从而确定牛奶中乳铁蛋白含量的影响因素,这些因素包括奶牛胎次、泌乳阶段、产奶量以及体细胞数等。结果显示,正常奶牛乳中乳铁蛋白含量在31.78～485.63 ug/mL之间;乳铁蛋白含量主要受奶牛泌乳阶段和产奶量的影响,与奶牛胎次无关,同时,乳中乳铁蛋白含量与SCS密切相关。这一研究结果表明,牛奶中乳铁蛋白含量也许对于奶牛乳房炎的检测有所帮助。第三部分:本试验共选用128头奶牛,通过直接测序方法,我们在奶牛乳铁蛋白基因启动区共发现6个SNP,其中2个SNP是首次发现。通过最小二乘,我们分析了这6个SNP所组成的基因型以及单倍体型对乳中乳铁蛋白含量、体细胞数的影响。结果显示,乳铁蛋白的含量以及体细胞数主要受奶牛所处泌乳月的影响,与奶牛胎次、乳铁蛋白基因型、乳铁蛋白单倍体型关系不大(P > 0.05)。第四部分:本试验目的是通过埋置抗原缓释剂ARD,从而使奶牛产生免疫反应,从而检测免疫条件下牛奶以及血清中乳铁蛋白含量的变化。试验共选择40头健康荷斯坦奶牛,根据奶牛胎次、泌乳日龄以及产奶量划分为试验组和对照组,试验组进行埋置ARD处理,对照组不埋置ARD。通过ELISA方法检测血清以及乳中乳铁蛋白的含量。结果显示,埋置ARD不能显著提高整个试验期内血清以及乳中乳铁蛋白的含量,但是显著提高了乳中7 d和血清11 d时的含量(P < 0.05)。乳中乳铁蛋白含量与血清中乳铁蛋白含量存在很强的相关性(r = 0.564, P < 0.01)。ARD中三个抗原的释放时间是0 d、14 d和28 d,抗原的首次释放显著提高了乳铁蛋白的含量,由此说明乳铁蛋白可能参与了体内的初期免疫应答过程。第五部分:本试验以小鼠为动物模型来研究免疫条件下,乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量的变化。选择120只健康昆明小白鼠,分别于分娩后4 d进行如下处理:A组注射灭菌生理盐水,B组注射Lipase+灭菌生理盐水,C组注射空ISCOM,D组Lipase+ISCOM。并于分娩后8d和12 d(即注射后4 d和8 d)采集各小鼠乳样、血样和乳腺组织,用间接ELISA法测定乳中和血清中的特异性IgG含量,用Real Time PCR检测小鼠乳腺中乳铁蛋白基因的相对表达量。结果表明,正常状态下,小鼠分娩后1 d时,乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量较高,而在分娩后4 d、8 d以及12 d时较低。免疫条件下,乳腺内乳铁蛋白基因表达显著上升。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-15
第一章绪论  15-28
  1.1 国内外研究进展  15-26
    1.1.1 乳铁蛋白的分子特性  15-18
    1.1.2 乳铁蛋白的功能以及作用机理  18-20
    1.1.3 乳铁蛋白含量变化的影响因素  20-21
    1.1.4 乳铁蛋白基因的结构特点  21-25
    1.1.5 乳铁蛋白基因表达与调控特点  25-26
  1.2 存在的问题  26
  1.3 本研究的总体思路  26-27
  1.4 本研究目的及意义  27-28
第二章初乳中乳铁蛋白的变化规律  28-31
  2.1 材料与方法  28-29
    2.1.1 乳样的采集  28
    2.1.2 乳清的分离及乳铁蛋白含量检测  28
    2.1.3 数据统计  28-29
  2.2 结果  29-30
    2.2.1 初乳中乳铁蛋白绝对含量的变化  29-30
    2.2.2 SDS-PAGE 方法检测初乳中乳铁蛋白的相对含量  30
  2.3 讨论  30-31
第三章常乳中乳铁蛋白含量的变化以及影响因素研究  31-39
  3.1 材料与方法  31-32
    3.1.1 奶牛的选择  31
    3.1.2 奶样的收集和处理  31
    3.1.3 乳铁蛋白含量的检测  31-32
    3.1.4 泌乳阶段和产奶量组别的划分  32
    3.1.5 体细胞数（Somatic cell count , SCC）评分  32
    3.1.6 数据分析  32
  3.2 结果  32-37
    3.2.1 正常奶牛组中乳铁蛋白含量  32-33
    3.2.2 乳铁蛋白与各个指标之间的相关性分析  33
    3.2.3 不同因素对乳中乳铁蛋白含量的影响  33-35
    3.2.4 正常奶牛组中不同因子的协同作用对乳中乳铁蛋白含量的影响  35-36
    3.2.5 乳中乳铁蛋白含量与SCS 之间的关系  36-37
  3.3 讨论  37-39
    3.3.1 正常奶牛乳中乳铁蛋白的含量  37
    3.3.2 奶牛是否处于正常状态的判定标准  37
    3.3.3 正常奶牛乳中乳铁蛋白含量的影响因素分析  37-38
    3.3.4 乳中乳铁蛋白含量与SCS 之间的关系  38-39
第四章乳铁蛋白基因启动子中 SNP 检测以及与其含量和体细胞数的关系  39-47
  4.1 材料与方法  39-41
    4.1.1 奶牛的选择  39
    4.1.2 奶样的收集以及体细胞测定  39-40
    4.1.3 乳铁蛋白含量的检测  40
    4.1.4 血样的采集以及DNA 的提取  40
    4.1.5 PCR 扩增、纯化后测序发现并确定SNP 位点  40
    4.1.6 数据分析  40-41
  4.2 结果  41-45
    4.2.1 基因的SNP 检测  41-42
    4.2.2 基因型以及基因频率  42-43
    4.2.3 乳中SCS 影响因素分析  43-45
  4.3 讨论  45-47
    4.3.1 乳铁蛋白基因的多态性  45
    4.3.2 奶牛胎次和泌乳月对牛奶中SCS 的影响  45-46
    4.3.3 乳铁蛋白基因多态性对乳中SCS 以及乳铁蛋白含量的影响  46-47
第五章免疫条件下乳铁蛋白含量的变化规律研究  47-56
  5.1 材料与方法  47-51
    5.1.1 试验奶牛、地点及时间  47-48
    5.1.2 抗原释放剂ARD（Antigen Release Devise）  48-49
    5.1.3 试验牛饲养管理及样品的采集  49-50
    5.1.4 体细胞数和乳常规检测  50
    5.1.5 奶牛外周血相检测  50
    5.1.6 间接ELISA 方法测定特异性抗Lipase 的Ig  50
    5.1.7 夹心ELISA 方法测定乳铁蛋白绝对含量  50-51
    5.1.8 数据分析  51
  5.2 结果  51-54
    5.2.1 血清以及乳中特异性抗Lipase 抗体的含量  51-52
    5.2.2 血清中乳铁蛋白的含量  52-53
    5.2.3 乳中乳铁蛋白的含量  53
    5.2.4 免疫乳中乳铁蛋白含量水平与初乳之间的比较  53-54
    5.2.5 血清中乳铁蛋白含量与WBC, LYMPH, GRAN 和MID 之间的相关性  54
    5.2.6 乳中乳铁蛋白含量与血清乳铁蛋白含量、以及不同乳成分之间的相关性  54
  5.3 讨论  54-56
第六章小鼠免疫刺激后乳腺中乳铁蛋白基因 MRNA 的表达变化初步研究  56-65
  6.1 材料与方法  56-59
    6.1.1 小鼠及饲养管理  56
    6.1.2 试验设计以及样品采集  56-57
    6.1.3 分子生物学试验关键试剂及仪器设备  57
    6.1.4 小鼠乳腺总RNA 的提取及反转录  57-58
    6.1.5 Real Time PCR 检测乳腺Lf 基因mRNA 的表达量  58-59
    6.1.6 数据分析  59
  6.2 结果  59-64
    6.2.1 ISCOM 免疫对小鼠乳及血清中总IgG 浓度和特异性IgG 效价的影响  59-60
    6.2.2 小鼠乳腺总RNA 的提取效果及其目的片段的PCR 检测  60
    6.2.3 Real Time PCR 扩增效率的检验  60-61
    6.2.4 小鼠Lf 基因和GAPDH 基因的扩增曲线及熔解曲线  61-62
    6.2.5 不同泌乳天数下小鼠乳腺中Lf 基因表达相对定量结果  62-63
    6.2.6 免疫条件下小鼠乳腺中Lf 基因表达相对定量结果  63-64
  6.3 讨论  64-65
    6.3.1 不同泌乳天数下小鼠乳腺中Lf 基因相对表达量  64
    6.3.2 免疫条件下小鼠乳腺中Lf 基因相对表达量  64-65
第七章全文结论  65-66
  7.1 初乳中乳铁蛋白含量变化规律  65
  7.2 常乳中乳铁蛋白含量及影响因素分析  65
  7.3 免疫条件下乳铁蛋白含量变化规律  65
  7.4 免疫条件下，小鼠乳腺内乳铁蛋白基因表达量变化  65
  7.5 本试验的创新点  65
  7.6 有待进一步研究的问题  65-66
参考文献  66-73
附录  73-80
  附录一间接ELISA 测定血清及乳清中特异性抗LIPASE 的IG相对含量的方法  73-75
  附录二夹心ELISA 试剂盒测定小鼠免疫球蛋白以及乳铁蛋白绝对含量的方法  75-78
  附录三 SDS-PAGE 电泳及定量分析蛋白方法  78-80
致谢  80-81
作者简历  81

牛奶中乳铁蛋白含量变化及其影响因素的研究

内容摘要

全文目录

相似论文