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一组凋亡相关蛋白p53，caspase 3，组织蛋白酶D，survivin和Fas在非小细胞肺癌中的表达及意义

作　者: 范垂锋
导　师: 王恩华
学　校: 中国医科大学
专　业: 病理学
关键词: 肺癌非小细胞肺癌(NSCLC) 凋亡 P53 caaspase3 组织蛋白酶D survivin Fas 免疫组织化学
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

前言凋亡是人体细胞重要和必备的生理过程。近年来凋亡异常被认为是参与肿瘤发生和进展的重要分子机制之一而受到越来越多的关注并成为肿瘤研究领域的热点方向之一。p53基因的抑癌作用在于对DNA异常的监控和修复,对未能修复的细胞则诱导其凋亡。p53基因突变参与多种肿瘤包括肺癌的发生与进展的机制之一可能与其诱导细胞凋亡的功能异常有关。caspase 3是凋亡过程的效应酶。组织蛋白酶D(Cathepsin D)(Cat D)是正常细胞内即普遍存在的溶酶体及内体酶。在恶性肿瘤中的表达并不恒定,结论分歧。新近的研究则集中于其参与凋亡的作用。有研究表明在十字孢碱诱导的人纤维母细胞的凋亡过程中该酶被从溶酶体释放到胞浆中并发现其与凋亡的线粒体通路存在关联。survivin作为凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族的一员被广泛研究,Survivin通过多途径抑制caspase效应分子的活化以及直接抑制其活性的方式实现抑制凋亡的作用。Fas属于死亡受体家族,与其配体(Fas—L)结合激活细胞凋亡通路。恶性肿瘤细胞及免疫细胞中Fas和Fas—L的状态制约机体对恶性肿瘤的免疫反应,可能是参与恶性肿瘤的发生和进展的机制之一。本研究利用免疫组织化学方法检测p53、caspase 3、cat D、survivin和fas在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨其表达的意义及可能存在的传导凋亡信号的作用。材料与方法1、材料80例原发性NSCLC肺癌组织及15例癌旁正常肺组织来自中国医科大学附属第一临床学院2001-2005年原发性肺癌患者外科手术切除标本,患者术前均未接受放、化疗。2、主要试剂抗体包括:鼠抗人单克隆anti-P53抗体;鼠抗人单克隆anti-caspase 3抗体;兔抗人多克隆anti-cathepsin D抗体;兔抗人多克隆anti-survivin抗体;兔抗人多克隆anti-Fas抗体。3、仪器切片机、烤片机、湿盒、高压锅、温育箱、Olympus显微镜、显微照相装置、微机等。4、免疫组化标本用中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋后,行抗P53、caspase3、cathepsin D、survivin和抗Fas免疫组织化学染色,染色方法按链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法试剂盒说明书步骤进行。以PBS代替一抗作为阴性对照。5、统计学分析采用SPSS for windows 13.0统计分析软件进行分析。采用卡方检验和确切概率法分析P53、caspase 3、cathepsin D、survivin及Fas表达与临床病理因素关系以及上述指标在肺癌细胞和癌周正常组织中表达的差异。采用Spearman相关分析分析上述各指标在肺癌中表达的关联。P＜0.05为有统计学意义。结果1、p53在NSCLC癌细胞及癌旁肺组织中的表达P53在癌旁正常肺组织中不表达(0/15)。在NSCLC癌细胞中P53的阳性率为53.8%(42/80),显著高于正常肺组织(P＜0.01)。P53在肺鳞癌和腺癌中的阳性率分别为52.9%(18/34)和56.4%(22/39),二者比较无显著性差异(P＞0.05)。P53在NSCLC癌细胞中的表达与患者性别、年龄、肿瘤分化、临床分期等病理、临床参数间无显著相关性(p＞0.05)。2、caspase 3在NSCLC癌细胞及癌旁肺组织中的表达Caspase 3在NSCLC癌周正常肺组织中表达,阳性率为46.67(7/15),在NSCLC癌细胞中也表达,阳性率为53.75%(43/80)。二者无显著差异(p＞0.05)。Caspase 3表达于NSCLC癌细胞胞浆和部分胞核。在肺鳞癌和腺癌中的阳性率分别为47.1%(16/34)和56.4%(22/39),二者比较无显著性差异(P＞0.05)。Caspase 3在NSCLC癌细胞中的表达与患者性别、年龄、肿瘤分化、临床分期等病理、临床参数间无显著相关性(p＞0.05)。3、Cathepsin D在NSCLC癌细胞及癌旁肺组织中的表达Cathepsin D在NSCLC癌周正常肺组织中表达,阳性率为53.33%(8/15)。在NSCLC癌细胞中也表达,阳性率为63.75%(51/80)。二者之间无显著差异(p＞0.05)。Cathepsin D表达于NSCLC癌细胞胞浆。在肺鳞癌和腺癌中的阳性率分别为61.8%(21/34)和64.1%(25/39),二者比较无显著性差异(p＞0.05)。Cathepsin D在NSCLC癌细胞中的表达与患者性别、年龄、肿瘤分化、临床分期等病理、临床参数间无显著相关性(p＞0.05)。4、survivin在NSCLC癌细胞及癌旁肺组织中的表达Survivin在NSCLC癌周正常肺组织中不表达(0/15)。在NSCLC癌细胞中表达的阳性率为47.50%(38/80),高于癌周正常肺组织(p＜0.01)。Survivin表达于NSCLC癌细胞胞浆。在肺鳞癌和腺癌中的阳性率分别为58.8%(20/34)和38.5%(15/39),二者比较无显著性差异(p＞0.05)。Survivin在NSCLC癌细胞中的表达与患者性别、年龄、肿瘤分化、临床分期等病理、临床参数间无显著相关性(p＞0.05)。5、Fas在NSCLC癌细胞及癌旁肺组织中的表达Fas在NSCLC癌周正常肺组织中表达,阳性率为60%(9/15)。在NSCLC癌细胞中也表达,阳性率为50%(40/80)。二者之间无显著差异(p＞0.05)。Fas表达于NSCLC癌细胞膜和胞浆。在肺鳞癌和腺癌中的阳性率分别为41.2%(14/34)和59.0%(23/39),二者比较无显著性差异(p＞0.05)。Fas在NSCLC癌细胞中的表达与患者性别、年龄、肿瘤分化、临床分期等病理、临床参数间无显著相关性(p＞0.05)。6、各蛋白表达的相关性分析P53和survivin在NSCLC中的表达水平呈正相关(R=0.262,P=0.020)。Cat D和Fas在NSCLC中的表达水平呈正相关(R=0.375,P=0.001)。结论(1)p53及survivin在NSCLC癌细胞中的表达高于癌周正常肺组织。(2)caspase 3、cat D和Fas在NSCLC癌细胞及癌周正常肺组织中的表达无显著差异。(3)p53、caspase 3、cat D、survivin和Fas在NSCLC癌细胞中的表达与病理类型、分化程度、患者年龄、性别、临床分期这些病理、临床参数无显著关联。(4)p53和survivin在NSCLC癌细胞中的表达呈正相关。(5)cat D和Fas在NSCLC癌细胞中的表达呈正相关。

全文目录

一、摘要  5-13
  1、中文论著摘要  5-9
  2、英文论著摘要  9-13
二、英文缩略语  13-14
三、论文  14-28
  1、前言  14-15
  2、材料和方法  15-17
  3、实验结果(附论文图片)  17-25
  4、讨论  25-26
  5、结论  26-28
四、本研究创新性的自我评价  28-29
五、参考文献  29-31
六、附录  31-41
  综述  31-39
    参考文献  37-39
  在学期间科研成绩  39-40
  致谢  40-41
  个人简介  41

一组凋亡相关蛋白p53，caspase 3，组织蛋白酶D，survivin和Fas在非小细胞肺癌中的表达及意义

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