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甲状旁腺激素相关肽（1-141和1-86）编码序列的克隆与表达

作　者: 陈凯
导　师: 张镜宇
学　校: 天津医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 甲状旁腺激素相关肽 141 86 表达 cAMP
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 54次
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内容摘要


甲状旁腺激素相关肽（PTH-related peptide，PTHrp）首先是在伴有恶性高钙血症的恶性肿瘤患者的血液中发现的，它与甲状旁腺激素（PTH）在生理功能上有很大的相似性，二者在N端的前13个氨基酸中有10个是完全一样的。PTHrp在机体的各种组织器官内广泛表达，但表达量却很低。PTHrp是一种多功能激素，在包括心血管、泌尿、神经系统在内的几乎所有生理系统都能发挥其特定的功能。 我们从人血细胞中提取基因组DNA，并以之为模板，PCR扩增PTHrp1-141编码序列，并将此序列克隆入非融合型表达载体pBV220及融合型表达载体pET-42a中。经表达条件优化后，重组表达载体pBV220／PTHrp1-141在E.coli DH5α的表达量仍然很低。重组表达载体pET-42a／PTHrp1-141和pET-42a／PTHrp1-86在E.coli BL21（DE3）的表达产物主要存在于包涵体中，占菌体蛋白总量的30％以上。经Western Blotting鉴定，融合表达产物GST-PTHrp1-141和GST-PTHrp1-86具有PTHrp免疫活性。包涵体复性后，首先经Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化，然后利用因子Xa切去担体蛋白GST，最后通过超滤进一步纯化和浓缩产物。重组PTHrp1-141与PTHrp1-86的分子量分别约为18KD和13KD。通过检测MG63细胞内cAMP浓度，我们可知重组PTHrp1-141与PTHrp1-86具有生物活性，而且，后者活性略高于前者，但都明显低于hPTH1-34。

全文目录


中文摘要  4-5
英文摘要  5-7
前言  7-10
实验流程  10-11
材料  11-13
方法与结果  13-66
  第一章 PTHrp_(1-141)在大肠杆菌中的表达  13-28
    方法  14-25
    结果  25-28
  第二章 GST-PTHrp_(1-141)融合蛋白在大肠杆菌中的表达  28-50
    方法  29-42
    结果  42-50
  第三章 GST-PTHrp_(1-86)融合蛋白在大肠杆菌中的表达  50-66
    方法  51-59
    结果  59-66
讨论  66-72
结论  72-73
参考文献  73-77
致谢  77

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体生物化学、分子生物学
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