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家蚕SCPx/SCP2基因的克隆和表达分析

作　者: 龚竞
导　师: 朱勇
学　校: 西南大学
专　业: 特种经济动物饲养
关键词: 家蚕 胆固醇 SCPx/SCP2 选择性剪接 基因表达
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 78次
引　用: 1次
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内容摘要


胆固醇是昆虫细胞膜成分，同时，更主要的作用是作为蜕皮激素的前体。由于昆虫体内缺少2种关键性的合成酶，昆虫不能通过自身从头合成胆固醇。事实上，昆虫主要依赖食物中的胆固醇来满足生长，发育和繁殖的需要。中肠是吸收转化胆固醇的主要部位，然后通过血．淋巴中的脂蛋白，运送到前胸腺转化利用；或是运送到脂肪体以自由的胆固醇和胆固醇酯储存起来。因而，昆虫胆固醇代谢研究的重点集中在胆固醇代谢运输系统。 SCP2蛋白是动物中广泛存在的脂质转运蛋白。哺乳动物中SCPx／pro-SCP2基因是一个融合基因，其中SCP2蛋白的主要功能是参与胆固醇和脂肪酸的代谢，在细胞内运输胆固醇及脂类。SCP2能将细胞中的类固醇物质运载到线粒体，形成类固醇激素，如昆虫的蜕皮激素；吸收自由的胆固醇形成细胞膜等。 本研究首先对家蚕SCPx／SCP2基因进行生物信息学分析，预测了这个基因核酸、mRNA、和蛋白质情况；利用RT-PCR，克隆了这个基因并调查该基因在不同组织、不同时期的表达情况；最后，通过pET表达系统将家蚕SCPx蛋白和SCP2蛋白进行体外表达，为以后的功能研究奠定基础。 以棉铃虫SCPx基因为参照，经过生物信息学分析，在家蚕基因组中找到了家蚕的SCPx／SCP2基因组序列，长为8902bp。基于基因结构预测，推测家蚕SCPx／SCP2基因有2个编码区1个内含子。用DNAstar软件将EST进行拼接，结果得到2个contigs。将家蚕的BmSCPx／BmSCP2基因在cDNA水平进行克隆、测序和分析，得到了家蚕BmSCPx／SCP2的编码区完整的序列。通过分析发现，该基因存在两种拼接形式，即BmSCPx和BmSCP2两种的mRNA形式。其中，BmSCPx长2165nt，BmSCP2长1035nt。经过实验验证，发现BmSCPx／SCP2基因的确有选择性拼接形式的存在，其中BmSCP2这种形式缺少了编码硫解酶结构域的区段的序列。 BmSCPx蛋白由536个氨基酸组成，BmSCP2蛋白由146个氨基酸组成。在线工具预测，发现BrnSCPx蛋白包含硫解酶-N，硫解酶-C和SCP2结构域。BmSCP2蛋白只含有SCP2结构域。BmSCPx和BmSCP2蛋白质的分子量、等电点分别是57.8kD、16.2kD和6.54、9.22。使用BLAST软件分析发现，BmSCPx蛋白与棉铃虫SCPx蛋白有88％同源性和94％相似性。与果蝇SCPx蛋白有64％同源性和79％相似性。按蚊SCPx蛋白65％同源性和76％相似性。并且无论是BmSCPx蛋白，还是BmSCP2蛋白，在C端都有Ser-Lys-Leu结构过氧化酶体的靶序

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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程（遗传工程）
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