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糖皮质激素对海马神经元影响的体外研究

作　者: 孙红宇
导　师: 张建宁
学　校: 天津医科大学
专　业: 外科学
关键词: 糖皮质激素 海马 神经元 凋亡 碱性成纤维细胞生长因子 Bcl－2 Bax 原代培养 星形胶质细胞条件培养液
分类号: R741.02
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要


糖皮质激素为应激激素，正常浓度下对于维持机体正常的生长发育以及生理和应激状态下内环境的稳定都是极为重要的，然而在各种应激损伤条件下糖皮质激素过度分泌，血浆中高水平的糖皮质激素持续作用可以透过血脑屏障进入脑组织，危害中枢神经系统。在中枢神经系统中，海马富含糖皮质激素受体，因此海马极易受到循环中过量的糖皮质激素的攻击，使其受到损伤。这就给临床上广泛应用糖皮质激素如地塞米松、甲基强的松龙治疗脑水肿提出了质疑，大量的研究结果也支持糖皮质激素会诱导海马神经细胞损伤的推测，但是体内实验受到机体各种复杂因素的影响难以了解糖皮质激素在体内确切的作用机制，体外实验又是从各自不同的实验目的出发，提供了零散的、不是十分系统的佐证，因此对于高浓度的糖皮质激素诱导海马神经元的认识仍然还处于初期的推测阶段，尚缺乏足够的实验证据和系统的研究报告。为此，如能阐明高浓度糖皮质激素对海马神经细胞损伤的过程及机制，将为糖皮质激素在脑水肿治疗中的合理应用提供帮助。 目的 在体外实验条件下，观察不同浓度的地塞米松对海马神经细胞的损伤。从细胞形态学、细胞酶学以及细胞凋亡相关蛋白的表达等方面进行分析，从而加深对糖皮质激素对海马神经细胞的损伤过程及机理的了解，同时对bFGF保护糖皮质激素诱导的海马神经元损伤作用及机制进行初步探讨，为临床上合理的应用糖皮质激素治疗脑水肿提供帮助。 糖皮质漱素对海马神经元形响的体外研究 医学硕士学位论文 方 法 本研究采用星形胶质细胞条件培养液对大鼠海马神经元原代培养进行改 良，较成功的获得了相对单一的海马神经细胞培养物（神经细胞纯度达到95％ 左右，可见单神经细胞网络）。在此基础上，对不同浓度的地塞米松对海马神 经细胞的损伤，应用倒置相差显微镜、Typan Blue染色及 My’检测对不同浓 度的地塞米松对海马神经细胞损伤进行细胞形态学及细胞酶学分析；应用 TUNEL方法原位检测不同浓度的地塞米松作用于海马神经细胞后细胞的凋 亡情况，观察其凋亡特征；结合免疫组织化学染色对不同浓度的地塞米松作 用于海马神经细胞后凋亡相关蛋白Bcl－2及Bax表达的改变进行观察；同时 分组比较观察bFGF对糖皮质激素诱导海马神经细胞凋亡的影响。 结 果 1．应用星形胶质细胞条件培养液改良的大鼠海马神经元培养方法较成功的 获得了相对单一的神经细胞培养物（神经细胞纯度可达95％左右，可见单神 经细胞网络）。与未用AS条件培养液组相比胶质细胞明显减少，细胞的生理 凋亡明显受抑制，细胞数目增多，细胞胞体增大、突起变长增粗，明显增加 海马神经元细胞活性。培养第7天细胞中NSE阳性率为95％左右，GFAP阳 性率3％左右。细胞生长到12l 天细胞最为丰满，胞体折光性强，有明显的 立体感，神经突起多而粗大，网络稠密。这种改良方法是观察单一海马神经 细胞的各项指标的理想培养方法。 2．地塞米松对海马神经元的损伤。 O）倒置相差显微镜观察显示经不同浓度的 DEX处理24 ’J、时后，10‘＼ IO‘SM 组神经细胞的形态与对照组相比无明显异常，10十10＼10’M组部分神经 细胞的突起变短，胞膜皱缩，折光性减弱，体积缩小，并有细胞出现核固缩 有时可见核碎裂。 仅）My检测发现海马神经元经不同浓度 DEX处理 24小时后，10－＼ 10”SM 组经 M17’检测 OD值与对照组相比差别无显著性意义；而 10”乙 10＼ 10”’M 天津医科大学2 糖皮质溢素对海马神经元影响的体外研究 医学硕士学位论文 组经 NlT检测 OD值与对照组相比差别有显著性意义；10刁、10＼ 10”’M组 经MTT检测OD值各组相比差别无显著性意义。 （）IUN’－－L检测显示正常培养的海马神经元TUNE染色偶见阳性核神经元 （凋亡率为丑03士1．71％）凋亡细胞形态各异，细胞皱缩，核固缩呈棕黄色。 DEX浓度为10久10“M组海马神经元凋亡细胞与对照组相比无明显增加； DEX浓度为 10＼ 10人 10“’M组海马神经元凋亡细胞与对照组相比有明显 增加；DEX浓度为 10“组海马神经元凋亡细胞与 10’M组相比进一步增加。 10“’M组海马神经元凋亡细胞与川“M组相比无明显增加。 K）台盼蓝染色显示不同浓度的DEX作用24小时后，在视野中各组着色神 经元均较少（＜5％），而且随着DEX浓度的着色神经元有所增加，但各组之 间无显著性差别。 （5）免疫组织化学凋亡相关蛋白scl－2、Bax染色发现DEX处理组10－’、10”

全文目录


中文摘要  4-8
英文摘要  8-12
前言  12-16
材料与方法  16-22
结果  22-33
讨论  33-46
机制简图  46-47
结论  47-48
致谢  48-49
参考文献  49-57
综述  57-68

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 神经病理学、病因学
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