学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

Wilson病ATP7B基因重组腺病毒载体对Wilson病人离体肝细胞作用的初步研究

作　者: 吴涛
导　师: 汤其强
学　校: 安徽医科大学
专　业: 神经病学
关键词: 肝细胞 原代培养 糖原染色 ATP7B蛋白 Ad-ATP7B
分类号: R742.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 2次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


研究背景人体内ATP7B基因的突变是Wilson病(肝豆状核变性)发病的根本原因,人体内铜的代谢是由一系列铜转运蛋白构成的传递链完成的,ATP7B基因突变造成ATP7B蛋白改变从而导致铜离子在体内蓄积进而造成肝脏和脑部为主的全身性病理损害。因此,作为一种单基因遗传病,肝豆状核变性最理想的治疗方法当属基因治疗。目的研究外源目的基因ATP7BcDNA在Wilson病病人离体肝细胞中的表达,观察ATP7B蛋白能否较长时间的表达,以及其表达水平的变化。方法体外培养Wilson病病人肝细胞,构建pAdxsi-GFP-ATP7B并转染肝细胞,选用免疫细胞化学技术和双抗体夹心酶免疫吸附法检测不同时间ATP7B蛋白的表达状况。结果1.体外成功分离和培养出Wilson病病人肝细胞,并通过糖原染色法证实。2. pAdxsi-GFP-ATP7B成功构建并将目的基因成功转入肝细胞。3.用免疫细胞化学技术证实肝细胞中有ATP7B蛋白的合成。4.用双抗体夹心酶免疫吸附法检测不同时间ATP7B蛋白的表达状况,其中ATP7B蛋白表达量在转染后的3-5天达到高峰,15天后表达显著下降。结论1.体外成功分离和培养出Wilson病人肝细胞。2 pAdxsi-GFP-ATP7B构建成功。3.目的基因ATP7BcDNA通过腺病毒载体成功转染入肝细胞。4.经转染后肝细胞能成功合成ATP7B蛋白,其表达量在转染后的3-5天达到高峰,14天后表达显著下降。

全文目录


中英文缩略表  5-7摘要  7-8Abstract  8-101 前言  10-122 实验材料与方法  12-27  2.1 实验材料  12-14    2.1.1 实验取材  12    2.1.2 主要仪器  12-13    2.1.3 主要试剂  13-14  2.2 实验方法  14-27    2.2.1 细胞培养试剂的配制  14-15    2.2.2 肝细胞鉴定试剂的配置  15-16    2.2.3 免疫细胞化学技术准备  16    2.2.4 鼠尾胶原的配制以及铺板  16-17    2.2.5 肝细胞的分离和培养  17-18    2.2.7 肝细胞的鉴定  18-19    2.2.8 Cacl_2法制备E.coli DH5a感受态细胞  19    2.2.9 pShuttle-CMV-EGFP重组穿梭载体酶切和磷酸化  19-20    2.2.10 含目的基因ATP7B的原始质粒酶切  20-21    2.2.11 将ATP7B目的基因克隆入穿梭载体pShuttle-CMV-EGFP  21    2.2.12 连接产物转化E.coli DH5a感受态细胞  21-22    2.2.13 重组腺病毒载体质粒的提取和鉴定  22    2.2.14 pAdxsi-GFP-ATP7B滴度的测定  22-24    2.2.15 pAdxsi-GFP-ATP7B 最佳感染复数(MOI)的测定  24    2.2.16 腺病毒载体感染细胞  24    2.2.17 免疫细胞化学技术检测细胞合成 ATP7B 蛋白  24-25    2.2.18 双抗体夹心酶联免疫吸附法检测细胞合成的 ATP7B 蛋白  25-273 实验结果  27-334 讨论  33-385 结论  38-39参考文献  39-42附录  42-43致谢  43-44综述  44-50  参考文献  48-50

相似论文

  1. STAT3、MMP-2在肝细胞癌中的临床意义,R735.7
  2. 黄曲霉毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导锦鲤原代肝细胞凋亡机制的初步研究,S856.9
  3. 免疫共沉淀联合质谱筛选肝核因子HNF3β相互作用蛋白质及初步功能研究,R341
  4. 核蛋白NDP52与肿瘤坏死因子受体相关因子TRAF6相互作用及临床意义的研究,R363
  5. 树突状细胞在多柔比星诱导的大鼠肾纤维化模型中的作用,R692.5
  6. 瘦素对鸡肝脏脱碘酶基因表达与活性的影响,S831
  7. 大鼠再生肝脏细胞周期的研究,Q253
  8. 小鼠再生肝抗GalN/LPS联合诱导急性肝损伤的UCP2作用研究,R575.3
  9. 人外周血单个核细胞体外向肝样细胞诱导分化的研究,R575.3
  10. EAN脑保护与脑损伤修复三细胞模型系统中的星形胶质细胞形态特征,R651.1
  11. 脑胶质瘤GST-π和LRP的表达与肿瘤细胞体外药物敏感性研究,R739.4
  12. 明胶海绵微粒化疗栓塞肝细胞癌术后调节性T细胞变化及其意义,R735.7
  13. 骨髓间充质干细胞和体细胞的共微囊化研究,R329
  14. 青岛地区乙肝病毒BCP基因突变与乙肝相关性原发性肝癌的相关性研究,R512.62
  15. 乙型肝炎病毒核心基因的PCR-RELP图案对中国肝细胞癌和肝硬化人群的临床意义,R735.7;R575.2
  16. 人胎肝细胞系L-02的功能检测和应用探讨,R657.3
  17. 神经生长因子及其受体在肝癌组织中的表达及其意义,R735.7
  18. 姜黄素对人肝癌耐药细胞系Bel7402/5-Fu耐药逆转作用的实验研究,R285.5
  19. 小鼠多能成体祖细胞的培养及冷冻保存,R329
  20. Shh信号传导途径在原代培养皮层星形胶质细胞氧化应激中的保护作用,R741

中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脑部疾病 > 肝豆状核变性
© 2012 www.xueweilunwen.com