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胞内抗体抑制BCR/ABL蛋白酪氨酸激酶活性诱导慢性髓系白血病细胞凋亡的实验研究

作　者: 徐冬
导　师: 赵春华
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 病理生理学
关键词: 胞内抗体 P210BCR/ABL 慢性髓系白血病 凋亡:K562细胞 蛋白酪氨酸激酶
分类号: R733.72
类　型: 博士论文
年　份: 2002年
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内容摘要


慢性髓系白血病（CML）特征性的BCR／ABL融合基因产物p210BCR／ABL异常增高的蛋白酪氨酸激酶（PTK）活性在CML病理发生中起关键作用。我们实验室应用基因重组技术构建了逆转录病毒载体MSCV-ib-IRES-eGFP，在真核细胞内表达针对ABL蛋白酪氨酸激酶活性域的基因工程单链抗体（sFv），又称为胞内抗体（intrabody）。为探讨应用胞内抗体技术抑制BCR／ABL PTK活性，阻断BCR／ABL信号转导途径，深入研究ABL蛋白酪氨酸激酶活性改变影响CML细胞凋亡特性的机制，并为最终用于临床治疗CML提供实验依据，本论文进行了以下几个方面的工作： 1．将逆转录病毒载体MSCV-ib-IRES-eGFP在原核系统扩增后转染包装细胞，制备出具有感染能力的病毒。用病毒上清转导BCR／ABL基因阳性的K562慢性髓系白血病细胞系，建立了表达抗ABL蛋白酪氨酸激酶胞内抗体的体外细胞模型。 2．研究胞内抗体在K562细胞内表达后，细胞总蛋白、p210BCR／ABL蛋白、c-ABL(p145ABL)蛋白酪氨酸激酶活性的变化，细胞凋亡特性的改变以及对细胞增殖、细胞内周期蛋白cyclin D2表达量、细胞周期时相分布的影响。 3．将表达胞内抗体的K562细胞接种裸鼠体内，通过动物实验研究胞内抗体对K562细胞体内致瘤性的的影响。 结果，获得纯化的表达抗ABL蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体（简称ib）和增强型绿色荧光蛋白（eGFP）的细胞模型：K562-ib-eGFP。该细胞内p210BCR／ABL和p145ABL蛋白表达水平无明显降低，但p210BCR／ABL和p145ABL酪氨酸激酶活性较未转导的K562细胞下降达76％（P＜0.05），细胞总蛋白酪氨酸激酶活性也下降48％（P＜0.05），提示胞内抗体在细胞内获得了正确折叠，并对靶蛋白PTK活性起到明

全文目录


缩略语表  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-13
第一章 胞内抗体在K562细胞内的表达  13-30
第二章 K562-ib-eGFP细胞凋亡特性的研究  30-56
第三章 胞内抗体对K562细胞体内致肿瘤性的影响  56-62
讨论  62-66
结论  66-67
参考文献  67-74
附图照片  74-86
综述1  86-95
综述2  95-105
撰写文章  105-106
致谢  106

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病 > 慢性白血病
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