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蛋白酪氨酸激酶及金雀异黄素对人肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化的影响

作　者: 梅煜明
导　师: 张璟
学　校: 第三军医大学
专　业: 内科学
关键词: 人肾小管上皮细胞上皮细胞-肌成纤维细胞转分化酸性成纤维细胞生长因子 α-平滑肌动蛋白蛋白酪氨酸激酶金雀异黄素转化生长因子β1
分类号: R692.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
下　载: 51次
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内容摘要

目的：肾间质纤维化是各种肾脏疾病进展到终末期肾衰的共同途径，在肾脏纤维化中起主导作用。肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation, TEMT)在肾间质纤维化中的作用日益受到重视，然而对其转分化的机制了解甚少。本文旨在探讨蛋白酪氨酸激酶(PTKs) 及金雀异黄素在人肾小管上皮细胞系(HKC)转分化中的作用，为肾小管-间质纤维化的防治提供理论依据。方法：将培养的人肾小管上皮细胞株分为三组：(1)对照组(C)：无血清培养；(2)aFGF组(A)：无血清培养基内加入80ng/ml的酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)；(3)genistein组(G)：无血清培养液内加入80ng/ml aFGF及不同浓度的金雀异黄素(genistein)。细胞均接种于Ⅰ 型胶原包被的培养表面，培养72小时。使用倒置相差显微镜、透射电镜、免疫细胞化学等方法对肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞形态变化及表型的转变进行评估，ELISA法观测HKC细胞上清液中纤粘连蛋白(FN)的表达，并对转分化过程中蛋白酪氨酸激酶(PTKs)的活性用流式细胞仪加以分析。采用RT-PCR技术对培养24小时后的HKC细胞TGFβ1 mRNA表达水平进行检测。结果：未加aFGF时，在胶原处理的培养表面生长的HKC细胞显示典型上皮细胞形态学特点。当加入浓度80ng/ml aFGF时呈离散生长，细胞形态和表型发生改变：体积增大、失去尖端-基底极性、细胞间紧密连接结构和微绒毛丢失、细胞延长、出现浸润特征的前后向双末端极性；在“划痕”模型中显示很强的迁移能力。免疫组化表明aFGF(A)组加入80ng/ml aFGF后角蛋白表达减少，α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白表达增强，细胞α-SMA阳性率(60.60±2.70%)较对照组(C)(3.35±1.45%)有显著性差异<WP=8>(P<0.01)。当G4,5组介入genistein浓度48、96μg/ml时，HKC细胞α-SMA阳性率为3.90±2.09%,3.98±1.75%，较aFGF组(A)明显降低(P<0.01)，同时α-SMA、波形蛋白表达减弱，角蛋白表达增强。ELISA检测纤粘连蛋白(FN)结果表明，对照组(C)有基础的FN表达(0.498±0.004 OD)；aFGF组(A)FN明显增高(0.701±0.047 OD),二者差异非常显著(P<0.01)；G组中加入一定剂量genistein(24，48μg/ml)可明显降低上清液中的FN(0.571±0.016, 0.499±0.002 OD vs A组，P<0.05)。流式细胞仪测定PTKs活性结果发现PTKs的活性随加入aFGF的浓度增加而增高，当aFGF的浓度为20,40,80ng/ml时，分别比对照组(C) PTKs的活性增加16%， 17%，246%，当介入genistein剂量为6,12,24,48μg/ml时，分别比aFGF组(A) PTKs的活性下降45.6%,53.5%,66%,81.9%。RT-PCR结果反映HKC细胞TGFβ1mRNA的表达与aFGF的浓度呈一定剂量效应关系，80 ng/ml时表达最高，应用genistein后，aFGF的刺激效应可被抑制，剂量为48μg/ml时与aFGF组(A)比较差异显著。(0.400±0.026 vs 0.947±0.015,P<0.01)。结论：1. 在体外aFGF可诱导HKC转分化。2. genistein可抑制aFGF诱导的小管上皮-肌成纤维细胞转分化。3. aFGF促进TGFβ1 mRNA的表达及FN的分泌与PTKs的活性高度相关，其效应可被genistein所抑制。4. HKC转分化的机制可能与PTKs活性过度激活及TGFβ1 mRNA高表达有关。5. 具有多种生物功效genistein在防治肾间质纤维化中具有很好的应用前途。

全文目录

中英文缩写一览表    3-4
英文摘要    4-7
中文摘要    7-9
论文正文蛋白酪氨酸激酶及金雀异黄素对人肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化的影响  9-53
  前言  9-11
  材料与方法  11-23
  结果  23-30
  讨论  30-34
  结论  34-35
  致谢  35-36
  照片  36-49
  参考文献  49-53
文献综述上皮-间质转化在肾间质纤维化中的意义  53-67
  参考文献  62-67

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