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旋毛虫新生幼虫编码p46 kDa抗原基因的克隆、表达及抗原性分析

作　者: 原丽红
导　师: 刘明远
学　校: 吉林大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 旋毛虫新生幼虫 cDNA 文库 p46 kDa 抗原 WN10 cDNA 克隆表达抗原性
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

旋毛虫病是由旋毛虫(Trichinella spiralis)引起的一种呈全球性分布的人兽共患寄生虫病,严重威胁着人民群众的身体健康。本研究利用分子生物学及免疫学技术,分离新生幼虫抗原基因,从而为旋毛虫病诊断抗原及保护性抗原的筛选及大量制备奠定基础。以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫新生幼虫cDNA 的学位论文">cDNA文库进行免疫筛选,从4×105个重组噬菌体中共获得156个阳性噬菌斑。其中WN10 cDNA 编码旋毛虫新生幼虫p46 kDa抗原,全长为1352 bp,含有1218bp完整的开放阅读框,氨基酸序列第1-18位为信号肽。GenBank数据库BlastN 同源性分析表明,与旋毛虫Ts ORF9.10 (U88241) 同源性为99%(899/906)。研究表明此基因在旋毛虫肌幼虫、新生幼虫、3日龄及5 日龄成虫期均有表达。利用PCR 技术, 从筛选得到的pBK-CMV-WN10重组质粒中扩增到不含信号肽序列的WN10基因片段,重组到原核表达载体pET-28a中。用IPTG诱导培养重组表达菌,对表达产物进行SDS-PAGE分析,结果显示,经IPTG诱导后重组菌体裂解产物与对照菌相比出现了1条相对分子量约为48 kDa的新条带。重组蛋白的抗原性分析表明,该重组抗原对小鼠产生了较好的免疫保护效果,其旋毛虫肠道成虫和肌幼虫的减虫率分别为64.28%和61.21%,说明重组抗原可诱导小鼠机体获得较强的抗旋毛虫攻击感染的能力及产生抗旋毛虫在肌肉组织中寄生的免疫保护作用。Western-blotting 检测显示,重组抗原可被旋毛虫感染的猪血清、小鼠血清以及重组抗原免疫的小鼠血清识别,与ELISA 检测结果一致,说明在旋毛虫感染动物及重组抗原免疫后,可以刺激宿主免疫系统使其产生抗此抗原的特异性抗体应答,重组抗原具有很好的抗原性,从而为旋毛虫病诊断抗原及保护性抗原的筛选及大量制备奠定基础。

全文目录

第一篇文献综述  11-29
  旋毛虫抗原研究进展  11-29
第二篇研究内容  29-85
  第一章旋毛虫新生幼虫编码p46 kDa 抗原基因的克隆  29-43
    1 材料与方法  30-34
    2 结果  34-38
    3 讨论  38-40
    4 小结  40-43
  第二章旋毛虫新生幼虫编码p 46 kDa 抗原基因的重组及高效表达  43-63
    1 材料与方法  43-50
    2 结果  50-59
    3 讨论  59-62
    4 小结  62-63
  第三章应用重组抗原检测旋毛虫感染动物抗体应答的研究  63-75
    1 材料与方法  63-68
    2 结果  68-71
    3 讨论  71-73
    4 小结  73-75
  第四章重组抗原对小鼠的保护性免疫研究  75-85
    1 材料与方法  75-77
    2 结果  77-81
    3 讨论  81-84
    4 小结  84-85
结论  85-87
参考文献  87-97
中文摘要  97-101
英文摘要  101-104
致谢  104-111

旋毛虫新生幼虫编码p46 kDa抗原基因的克隆、表达及抗原性分析

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