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脂麻花醇提物体外抗肿瘤生物活性及其机理的初步研究

作　者: 温咏平
导　师: 许华
学　校: 暨南大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 脂麻花醇提物抗肿瘤 Hela细胞细胞凋亡 caspase Fas
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：筛选和分离脂麻花醇提物中的抗肿瘤活性组分,并探讨其有效组分抗肿瘤作用的机理。方法：系统溶剂法从脂麻花乙醇提取物中萃取分离出不同的组分,用MTT法观察脂麻花不同提取物体外对肿瘤细胞株增殖的影响；选取活性较好的组分SIA,检测其对敏感肿瘤细胞株增殖抑制活性的时效关系。进行Hoechst33258染色,观察SIA诱导Hela细胞凋亡作用；采用PI染色和流式细胞术,观察SIA对细胞凋亡率及细胞周期的改变；应用caspase活性检测试剂盒,观察SIA对caspase-3、caspase-8、caspase-9活性的影响；流式细胞仪检测Fas蛋白表达的变化。结果：(1)体外抗肿瘤作用：结果显示,脂麻花醇提物的石油醚和乙醚提取部位对肿瘤细胞株(人肝癌细胞株smmc-7721、人宫颈癌细胞株Hela、人食管鳞癌细胞株KYSE-410和人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞)的增殖具有明显的抑制活性。对石油醚部位进一步分离得到的6个组分,其中SIA组分抗肿瘤效果最好,对多种肿瘤细胞株表现出不同程度的抑制作用,尤其对Hela细胞的抑制作用较强,且呈剂量、时间双重依赖性的特点(P<0.05)。(2)对细胞凋亡的影响：形态学检查可见,SIA200μg/mL作用于Hela细胞12h后,肿瘤细胞明显变小变圆,细胞存活率降低,细胞核固缩并出现致密浓染蓝白色颗粒状荧光的凋亡小体。细胞周期检查结果显示,SIA50μg/mL及100μg/mL作用于Hela细胞48 h后,Go/G1期细胞减少(P<0.05),S期细胞增多(P<0.01),G2/M期细胞减少,细胞凋亡率显著增高(P<0.05)。SIA 100μtg/mL作用于肿瘤细胞后,Caspase家族中caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的活性呈时间依赖性增高(P<0.01)。SIA (25、50、100μg/mL)作用于Hela细胞48 h后对Fas蛋白的表达呈剂量依赖性升高,在高剂量(100μg/mL)时较明显(P<0.05)。结论：(1)脂麻花醇提物石油醚和乙醚提取部位对体外培养的多种肿瘤细胞株具有明显的抗增殖作用；(2)脂麻花石油醚提取部位分离的组分SIA对体外培养的多种肿瘤细胞具有不同程度的增殖抑制作用,其中对人宫颈癌细胞Hela的抑制作用最强,其抑制作用呈一定的剂量依赖性和时间依赖性。(3)脂麻花提取物组分SIA可诱导细胞凋亡,影响细胞周期分布,可能和其抗肿瘤作用机理有关。肿瘤细胞内Fas蛋白的表达上调及凋亡通路中caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的激活可能参与了SIA诱导肿瘤细胞凋亡的作用。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-8
目录  8-9
第一章前言  9-23
  1.1 抗肿瘤药物概述  9-10
  1.2 癌细胞及其凋亡概述  10-20
  1.3 脂麻花研究概况  20-22
  1.4 本课题的选题依据  22-23
第二章脂麻花抗肿瘤有效部位的筛选  23-36
  2.1 引言  23
  2.2 材料与方法  23-26
  2.3 实验方法  26-28
  2.4 实验结果  28-35
  2.5 讨论  35-36
第三章脂麻花提取组分SIA抑制肿瘤细胞增殖作用机制的研究  36-52
  3.1 引言  36
  3.2 材料与方法  36-39
  3.3 实验结果  39-46
  3.4 讨论  46-51
  3.5 问题与展望  51-52
第四章结论  52-53
参考文献  53-58
致谢  58-59
论文发表情况  59

脂麻花醇提物体外抗肿瘤生物活性及其机理的初步研究

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