学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

应用蛋白芯片筛选乳腺癌肿瘤相关标志物的研究

作　者: 张波
导　师: 钟理
学　校: 河北大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 乳腺癌肿瘤相关标志物自身抗体蛋白芯片 ELISA
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 36次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目前乳腺癌诊断主要通过影像学手段,存在一定的创伤性和危险性,不利于乳腺癌的早诊、早发现。应用血清学肿瘤标志物(Tumor Marker, TM)检测可以降低病人检查的创伤和痛苦。但现有的乳腺癌血清肿瘤标志物敏感性、特异性不高,因此,识别更多的敏感性和特异性高的乳腺癌血清肿瘤相关标志物进行联合检测,具有重要意义,已成为临床上的迫切需要。本试验希望筛选出一些较特异、敏感的乳腺癌肿瘤相关标志物,从而为开发出一种廉价的诊断用乳腺癌蛋白芯片打下基础。试验目的：从乳腺癌T7噬菌体展示文库中筛选乳腺癌肿瘤相关标志物,用于乳腺癌的检测。试验方法：应用自身抗体原理结合蛋白芯片技术,用乳腺癌患者血清和正常人血清对文库进行大规模筛选,然后对所得数据进行标准化处理和t检验,以P<0.01为差异极显著。再结合线性回归分析,选择在病人中高表达的克隆做PCR鉴定,选取合适片段大小的克隆测序,序列结果做BLAST比对,选出和肿瘤相关的有意义蛋白克隆做进一步的验证,检测其对乳腺癌诊断的价值。试验结果：试验用15份乳腺癌病人血清和15份正常人血清对文库大规模筛选,共筛选出115个差异极显著的噬菌体克隆。结合线性回归分析,选取出其中的22个克隆其相应自身抗体在病人血清中高表达,对这22个克隆做PCR分析,最后选取12个克隆进行测序,经过与GeneBank数据库中的已知序列比对分析,发现了1个与肿瘤相关的蛋白为锌指蛋白143。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-9
第1章文献综述  9-22
  1.1 乳腺癌  9-10
    1.1.1 乳腺癌及其危害  9
    1.1.2 乳腺癌目前的检测方法  9-10
  1.2 乳腺癌肿瘤标志物的研究进展  10-14
    1.2.1 肿瘤标志物的基本内容  10-11
    1.2.2 目前研究的乳腺癌相关标志物  11-14
    1.2.3 肿瘤标志物的筛选方法  14
  1.3 蛋白质芯片的研究进展  14-20
    1.3.1 蛋白质芯片的概念及原理  15
    1.3.2 蛋白质芯片的分类  15-16
    1.3.3 蛋白质芯片的制备及分析过程  16-18
    1.3.4 蛋白质芯片的应用  18-20
  1.4 研究的目的及意义  20-22
第2章材料和方法  22-31
  2.1 主要试验材料  22-24
    2.1.1 试验材料与试剂  22
    2.1.2 培养基和缓冲液的配制  22-23
    2.1.3 主要试验仪器  23-24
  2.2 试验方法  24-31
    2.2.1 生物淘洗  24-26
    2.2.2 芯片构建与高通量筛选  26-27
    2.2.3 统计学分析  27-28
    2.2.4 乳腺癌相关蛋白的鉴定  28-29
    2.2.5 ELISA试验验证特异性和敏感性  29-31
第3章试验结果与分析  31-47
  3.1 淘洗后的文库稀释铺板  31-32
  3.2 芯片构建与高通量筛选结果  32-42
    3.2.1 芯片构建  32
    3.2.2 高通量筛选  32-33
    3.2.3 检测数据标准化结果  33-39
    3.2.4 统计分析结果  39-42
  3.3 乳腺癌相关蛋白的PCR结果  42-47
    3.3.1 PCR电泳图  42-43
    3.3.2 乳腺癌相关蛋白的序列测定  43-44
    3.3.3 乳腺癌相关蛋白的ELISA检测  44-47
第4章讨论  47-49
第5章结论  49-50
参考文献  50-55
致谢  55

应用蛋白芯片筛选乳腺癌肿瘤相关标志物的研究

内容摘要

全文目录

相似论文