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cPL双抗体夹心ELISA检测犬急性胰腺炎方法的建立与应用

作　者: 陈宇驰
导　师: 侯加法
学　校: 南京农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: cPL 双抗体夹心ELIsA检测板 诊断 急性胰腺炎 犬
分类号: S858.292
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


犬急性胰腺炎是临床上对犬危害较大的一种内科疾病,急性胰腺炎发病急、病程短、临床症状严重、难以治愈,甚至导致死亡。有很多急性病例由于未得到确切的诊断,耽误治疗而发展为慢性或亚慢性胰腺炎。病情反复发作,给患犬带来极大的痛苦,也给犬主带来了很多麻烦。因此,研制一种快速、准确诊断犬急性胰腺炎的方法具有重要的意义。本试验依据cPL检测犬胰腺炎的特异性、敏感性和准确性的特点,按照cPL的DNA序列重组cPL,并研制抗新西兰白兔的抗犬胰脂肪酶抗体(cPL-AB-N)和抗美国白兔的抗犬胰脂肪酶抗体(cPL-AB-A),利用cPL的免疫活性原理,成功地制备了检测cPL双抗体夹心ELISA检测板。并用倍比稀释的含有cPL标准溶液对所建立的ELISA检测板进行验证,结果表明,所建立的ELISA检测板检测所得的曲线与标准曲线基本吻合。然后,我们用cPL双抗体夹心ELISA检测板对40只健康犬的血清的cPL的浓度进行检测,其中除了样本T30的检测结果为365.6μg L-1外,其他的值均在文献报道的参考范围之内,故本试验选择与文献报道的参考范围一致,即健康犬血清中犬cPL的浓度的参考范围为2.2-119.2μg L-1。为cPL双抗体夹心ELISA检测板的临床应用提供了必要的参考依据。最后,我们使用所制得的cPL双抗体夹心ELISA检测板,并对照本试验所制定的参考范围,对40份来自于临床疑似犬急性胰腺炎的犬血清样本进行检测,只有一个样本(T38)的cPL含量在我们所建立的标准范围2.2-119.2μgL-1之内,其他39个样本的cPL含量均远远高于正常标准范围的上限,有24个血清样本的cPL含量已经超过了150.0μg L-1。有4个血清样本的cPL浓度为都已经超过了200μg L-1,有的甚至超过正常范围(2.2-119.2μg L-1)最高限的一倍还多。可依据犬血清中cPL含量的检测结果,然后结合患犬所表现出来的临床症状诊断是否患有胰腺炎。此试验为临床确诊犬急性胰腺炎提供了快速、准确的方法。本试验结果表明,使用ELISA检测板对cPL的浓度进行检测从而进行诊断犬急性胰腺炎是一种准确、方便、快捷的检测方式,值得在兽医临床上推广。

全文目录


目录  4-8摘要  8-9ABSTRACT  9-11缩略语  11-12前言  12-13第一部份 文献综述  13-44  第一章 犬急性胰腺炎病因及病理发生  13-29    1 犬胰腺解剖结构  13    2 犬胰腺的生理功能  13-16      2.1 分泌消化酶  14      2.2 防止自体消化  14-15      2.3 胰腺分泌的调节  15-16    3 胰腺炎  16-29      3.1 犬急性胰腺炎的病因  16-20        3.1.1 营养,高脂蛋白血症,遗传因素  18-19        3.1.2 药物,毒素,高钙血症  19        3.1.3 导管堵塞  19-20        3.1.4 十二指肠反流,胰腺创伤和胰腺局部缺血  20        3.1.5 其他  20      3.2 犬急性胰腺炎的发病机制  20-27        3.2.1 "共同通道"学说与胰酶的异常激活  21-23        3.2.2 细胞因子的"瀑布效应"和全身炎症反应  23-25        3.2.3 胰腺微循环障碍  25-26        3.2.4 胰腺细胞凋亡  26        3.2.5 肠道细菌移位  26-27      3.3 急性胰腺炎时的病理改变  27-29        3.3.1 局部变化  27        3.3.2 全身变化  27-29  第二章 犬胰腺炎诊断概述  29-38    1 病史和临床症状  29    2 影像学检查  29-30    3 胰腺活检  30    4 实验室诊断  30-38      4.1 血液学检查  30      4.2 血液生化指标测定  30-38        4.2.1 淀粉酶(AMYLASE,AMY)  32-33        4.2.2 脂肪酶(LIPASE,LP)  33        4.2.3 犬胰脂肪酶免疫反应性(CANINE PANCREATIC LIPASE IMMUNOREACTIVITY,CPLI)  33-35        4.2.5 胰石蛋白(PANCREATIC STONE PROTEIN,PSP)  35        4.2.6 白细胞介素(INTERLEUKIN,IL)  35        4.2.7 肿瘤坏死因子(TUMOR NECROSIS FACTOR,TNF-A)  35-36        4.2.8 急性时相性蛋白(ACUTE PHASE PROTEIN,APP)  36        4.2.9 多形核粒细胞弹性蛋白酶(POLYMORPHONUCLEAR LEUKOCYTE ELASTASE,PMN-E)  36        4.2.10 胰蛋白酶原激活肽(TRYPSINOGEN ACTIVATION PEPTIDE,TAP)  36-37        4.2.11 磷脂酶A2(PHOSPHOLIPASE A2,PLA2)  37-38  参考文献  38-44第二部分 试验研究  44-77  第三章 CPL双抗体夹心ELISA检测板的建立与检测  44-57    1 材料与方法  45-49      1.1 材料  45-46        1.1.1 试验动物  45        1.1.2 试验样品  45        1.1.3 重组犬胰脂肪酶(RECOMBINANT CPL,RE-CPL)  45        1.1.4 主要试剂  45-46        1.1.5 主要仪器  46      1.2 方法  46-49        1.2.1 纯化犬胰脂肪酶(CANINE PANCREATIC LIPASE,CPL)  46        1.2.2 制备犬胰脂肪酶(CPL)标准浓度溶液  46        1.2.3 空白对照液  46        1.2.4 制作和纯化抗新西兰白兔的抗犬胰脂肪酶抗体(CPL-AB-N)  46-47        1.2.5 制作和生物素化抗美国白兔的抗犬胰脂肪酶抗体(CPL-AB-A)  47-48        1.2.6 建立测量犬胰脂肪酶免疫活性的ELISA方法  48-49    2 结果与分析  49-52      2.1 CPL的标准溶液  49-50      2.2 CPL-AB-N和CPL-AB-A  50      2.3 建立CPL双抗体夹心ELISA检测板  50      2.4 CPL双抗体夹心ELISA检测板的检测  50-52    3 讨论  52-57      3.1 纯化CPL制备犬胰脂肪酶标准浓度溶液  52      3.2 制作和纯化CPL-AB-N及生物素化CPL-AB-A  52-53      3.3 制作和验证ELISA检测板  53-54        3.3.1 制作双抗体夹心ELISA检测板  53        3.3.2 测定双抗体夹心ELISA检测板的反应条件  53        3.3.3 使用CPL的标准溶液检测双抗体夹心ELISA检测板  53-54      3.4 用ELISA检测犬血清中的CPL的优点  54-57        3.4.1 CPL的敏感度、特异度和准确度高  54        3.4.2 ELISA检测板检测CPL的特异性高  54-57  第四章 健康犬CPL双抗体夹心ELISA检测板的检测研究  57-65    1 材料与方法  57-58      1.1 材料  57-58        1.1.1 试验动物  57        1.1.2 主要试剂  57        1.1.3 主要仪器  57        1.1.4 阳性对照组和空白对照组  57-58        1.1.5 生物素化的抗犬胰脂肪酶抗体(CPL-AB-A)  58      1.2 方法  58        1.2.1 制备犬血清  58        1.2.2 使用双抗体夹心ELISA检测板进行检测  58    2 结果与分析  58-61    3 讨论  61-65      3.1 制备CPL溶液  61      3.2 建立犬胰脂肪酶抗体(CPL)的参考范围  61-62      3.3 CPL对诊断犬急性胰腺炎的诊断意义  62-65        3.3.1 双抗体夹心ELISA检测板的特异性  62        3.3.2 双抗体夹心ELISA检测板的方法简单易行  62-65  第五章 CPL双抗体夹心ELISA检测板的诊断研究  65-73    1 材料与方法  65-66      1.1 材料  65-66        1.1.1 试验样本  65        1.1.2 主要试剂  65        1.1.3 主要仪器  65        1.1.4 阳性对照组和空白对照组  65-66        1.1.5 生物素化的抗犬胰脂肪酶抗体(CPL-AB-A)的抗抗体  66      1.2 方法  66        1.2.1 制备犬血清  66        1.2.2 使用双抗体夹心ELISA检测板进行检测  66    2 结果与分析  66-69      2.1 检测样本、阳性对照组及空白对照组的检测结果  67-69    3 讨论  69-73      3.1 制备犬血清和CPL溶液  69      3.2 使用血清中CPL的浓度诊断急性胰腺炎  69      3.3 CPL双抗体夹心ELISA检测板的优点  69-73        3.3.1 CPL的敏感度、特异度和准确度高  69-70        3.3.2 ELISA检测板检测CPL的特异性高  70-73  参考文献  73-77全文总结  77-78创新之处  78-79致谢  79-80在读硕士期间发表文章和参加学术活动  80-81

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家畜 > 犬
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