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微生物来源的抑制VCAM-1基因表达的活性物质的筛选研究

作　者: 陈丽萍
导　师: 乔建军；张华
学　校: 天津大学
专　业: 制药工程
关键词: VCAM-1 高通量筛选基因表达
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 17次
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内容摘要

为了筛选对靶基因VCAM-1的表达具有调节作用的生物活性物质,建立了基于人重组细胞系的高通量的筛选模型,使用荧光素酶在96孔板上来筛选对上述靶基因的表达具有调节作用的微生物代谢产物。筛选模型来源于细胞系ECV304的重组细胞株N1-14,用于筛选抑制VCAM-1基因表达的活性物质,以期发现治疗风湿性关节炎等免疫性疾病的药物。该筛选系统是稳定转染的细胞系,含有与荧光素酶报告基因相融合的VCAM-1基因的转录调节元件。通过对5159株微生物来源的总计10318个样品的筛选,得到初筛阳性株414株,复筛阳性株152株,并在此基础上对其中2株微生物产生的活性化合物进行了深入的研究。由真菌FO-5897的发酵液中分离得到一个已知化合物Ascofuranone,该化合物曾被报道具有降血脂抗肿瘤的活性,值得注意的是,我们首次发现了该化合物具有抑制VCAM-1基因表达的作用,该发现有可能对其降血脂作用的深入研究提供帮助。另外,从一株放线菌K-670的代谢产物中分离到了一个活性化合物Zelkovamycin,经¹H-¹H COSY, ¹³C-¹H COSY, ¹³C-¹H HMQC, ¹³C-¹H HMBC, 15N-¹H HMQC, 15N-¹H HMBC等波谱学研究得知,其分子结构中含有六个非普通的氨基酸和两个普通氨基酸,为一个环八肽类的化合物。该化合物对VCAM-1报告基因的表达显示出较好的选择性的抑制活性,其IC50值为9.5μg/ml,形态学研究表明该菌株属于链霉菌属。

全文目录

中文摘要  2-3
ABSTRACT  3-5
第一章文献综述  5-21
  1.1 血管细胞粘附分子（VCAM-1）与炎症性疾病  5-12
  1.2 新的药物筛选靶位点和筛选技术  12-21
第二章调节VCAM-1基因表达的高通量筛选方法的建立  21-29
  2.1 材料与方法  21-25
  2.2 实验结果  25-27
  2.3 讨论  27-29
第三章真菌FO-5897产生的调节VCAM-1表达的活性物质  29-35
  3.1 FO-5897 菌株发酵液的筛选结果及活性组分的分析  29-30
  3.2 真菌FO-5897 的发酵和活性化合物的分离纯化  30
  3.3 FO-58976 的理化性质和化学结构  30-32
  3.4 FO-58976 的生物活性的研究  32-33
  3.5 讨论  33-35
第四章链霉菌K-670产生的抑制VCAM-1基因表达的活性物质  35-60
  4.1 链霉菌K-670 的形态学研究  35-39
  4.2 K-670 发酵液样品的活性及活性组分的初步分析  39-40
  4.3 K-670 菌株的发酵及活性物质的分离提取  40-43
  4.4 新化合物K-670-a 的理化性质和结构解析  43-56
  4.5 K-670-a、b、d 的生物活性的研究  56-59
  4.6 讨论  59-60
参考文献  60-64
发表论文和科研情况说明  64-65
致谢  65

微生物来源的抑制VCAM-1基因表达的活性物质的筛选研究

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