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目的：研究去氢骆驼蓬碱(Harmine, HAM)体外抗肿瘤作用,观察不同浓度去氢骆驼蓬碱对肝母细胞瘤HepG2细胞体外增殖抑制作用和致凋亡作用,明确其抗癌作用机制,为去氢骆驼蓬碱应用于临床抗肿瘤治疗提供实验依据。方法：1.CCK-8方法检测去氢骆驼蓬碱对肝母细胞瘤HepG2细胞的增殖抑制作用：以0,0.625,1.25,2.50,5.00,10.00,20.00μg/ml药物浓度作用于HepG2细胞48 h,同时设DMSO对照组,检测去氢骆驼蓬碱对肝母细胞瘤HepG2细胞的增殖抑制作用。2.克隆形成抑制试验：以0,0.625,1.25,2.50,5.00μg/ml药物浓度作用于肝母细胞瘤HepG2细胞,同时设DMSO对照组,孵育7天后,结晶紫染色,检测去氢骆驼蓬碱对肝母细胞瘤HepG2细胞克隆形成的影响。3.细胞形态学观察凋亡细胞：以0,5.00μg/ml药物浓度作用于肝母细胞瘤HepG2细胞48 h,同时设DMSO对照组,用Hoechest 33258染色法来观察凋亡细胞形态学改变。4.PI单染检测亚二倍体率和细胞周期：以0,5.00,10.00,20.00μg/ml药物浓度作用于肝母细胞瘤HepG2细胞,同时设DMSO对照组,检测48 h后亚二倍体率和细胞周期比例。5.Annexin V-PI双染测定细胞凋亡比例：以0,5.00,10.00,20.00μg/ml药物浓度作用于肝母细胞瘤HepG2细胞,同时设DMSO对照组,检测48 h后细胞早期凋亡率。6.细胞线粒体膜电位检测：以0,5.00μg/ml药物浓度作用于肝母细胞瘤HepG2细胞,同时设DMSO对照组,检测48 h后细胞线粒体膜电位变化情况。7. Western-Blot技术检测Bcl-2家族蛋白和Caspase家族蛋白水平：以0,1.25,2.50,5.00μg/ml药物浓度作用于肝母细胞瘤HepG2细胞,同时设DMSO对照组,检测蛋白水平。结果：1.去氢骆驼蓬碱作用于肝母细胞瘤HepG2细胞48 h后,细胞存活率明显降低,随着药物浓度的升高,增殖抑制率增强,具有显著意义(P<0.05),去氢骆驼蓬碱抑制肝母细胞瘤HepG2细胞增殖的IC50为9.80 gg/ml。2.去氢骆驼蓬碱作用于肝母细胞瘤HepG2细胞7天后,随着药物浓度增加克隆逐渐减小,且克隆数量逐渐减少,产生明显的克隆形成抑制作用。3.去氢骆驼蓬碱作用于肝母细胞瘤HepG2细胞48 h后,对照组细胞形态结构正常完整,药物组中可见HepG2细胞形态变小,胞核固缩、边聚和裂解、凋亡小体形成等凋亡形态学变化。4.去氢骆驼蓬碱作用于肝母细胞瘤HepG2细胞48 h后,PI单染流式细胞仪检测细胞周期的G1期前有亚二倍体凋亡峰,去氢骆驼蓬碱以DMSO,0,5.00,10.00,20.00μg/ml药物浓度作用于HepG2细胞48h后凋亡峰分别为5.2%,4.5%,10.7%,18.0%,21.4%；同时检测到G1期细胞数明显减少,S期细胞数和G2期细胞数明显增加,细胞阻滞于G2期。5.去氢骆驼蓬碱作用于肝母细胞瘤HepG2细胞48h后,Annexin V-PI双染实验检测实验组细胞出现明显的早期凋亡细胞群。6.去氢骆驼蓬碱作用于肝母细胞瘤HepG2细胞48h后,在双色滤光片下观察,对照组为高红高绿,实验组为高绿低红,提示线粒体膜电位下降。7.去氢骆驼蓬碱作用于肝母细胞瘤HepG2细胞48 h后,Western-Blot检测到Bcl-2家族成员中Bcl-2,Mcl-1,Bcl-xl蛋白减少,Bax蛋白不变,Bcl-2/Bax,Mcl-1/Bax, Mcl-1/Bax比值下降,Caspase-3和Caspase-9活化。结论：1.去氢骆驼蓬碱能显著抑制肝母细胞瘤HepG2细胞的生长,在0-20μg/ml范围内表现为浓度依赖性；2.去氢骆驼蓬碱能够诱导肝母细胞瘤HepG2细胞的凋亡3.去氢骆驼蓬碱通过线粒体途径诱导肝母细胞瘤HepG2细胞的凋亡。
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