学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

胰岛素—丝素纳米颗粒结合物的生物合成及作为药物缓释系统的评价

作　者: 阎海波
导　师: 张雨青
学　校: 苏州大学
专　业: 特种经济动物饲养
关键词: 丝素纳米颗粒胰岛素生物结合 ELISA 交联
分类号: R94
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 83次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

家蚕茧脱胶后可以获得一种生物相容性良好的高分子蛋白纤维—丝素。这种丝素纤维可溶解在高浓度的中性盐如氯化钙和乙醇水溶液三元系统中,经过透析脱盐处理后可获得水溶性的再生液态丝素。改变蚕丝脱胶和丝素溶解的条件就可以制成分子量范围分布不同的丝素肽混合物(10~200 kDa)。当将这种再生液态丝素迅速引入到能与水混溶的极性有机溶剂如甲醇、乙醇或丙酮中,丝素蛋白因快速失水、变性而引起其结构β化,就生成乳白色的丝素微粒。经过有机溶剂的分离就可以制成粒径分布在40~120 nm范围内丝素纳米颗粒。这种结晶性的丝素纳米颗粒不溶于水,但经过超声处理能良好分散在水溶液中。应用戊二醛为交联剂,通过丝素纳米颗粒表面存在的ε-氨基将治疗糖尿病的常用多肽药物-胰岛素固定在丝素纳米颗粒表面,制成固定化胰岛素的丝素纳米颗粒或称之为胰岛素-丝素纳米颗粒生物结合物(简称Ins-SFNs)。本实验应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对Ins-SFNs生物结合物的体外特性作了系统分析,探讨了这种生物结合物的最佳制备工艺或条件。当戊二醛浓度为0.7%、丝素纳米颗粒与多肽药物之比为15:30(mg/IU)情况下,4℃交联8h可获得较好的最佳修饰效果,其回收率可达到90~120%。当胰岛素与丝素纳米颗粒表面氨基共价结合后,其生物结合物的热稳定性以及对胰蛋白酶消化的抵抗力都有较大提高;Ins-SFNs在血清中的体外半衰期也明显高于自然胰岛素(2.5倍)。对流免疫电泳分析表明Ins-SFNs在兔体内无免疫原性。体内活性试验表明,Ins-SFNs在四氧嘧啶诱导的糖尿病模型小鼠体内降血糖的活性比未修饰的自然胰岛素长8倍左右。上述实验结果充分表明,胰岛素与丝素纳米颗粒生物结合后,其在体外和体内的生物稳定性明显提高。实验结果显示利用蚕丝蛋白制成的丝素纳米颗粒,不仅是酶修饰或固定化的优良载体,也是多肽药物良好的缓释载体。今后,很有必要在动物体内进行药理学、毒理学等方面的深入研究与探索。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-7
前言  7-9
第一章文献综述  9-25
  1 胰岛素的组成与结构  10-17
    1.1 胰岛素的类型  11-12
    1.2 胰岛素的剂型  12-13
    1.3 胰岛素的生物学作用与调节  13-14
    1.4 胰岛素治疗糖尿病的优缺点  14-15
    1.5 胰岛素治疗糖尿病的发展前景  15-17
  2 纳米给药系统  17-21
    2.1 纳米药物的载体材料  17-18
    2.2 载药纳米粒种类  18-19
    2.3 纳米颗粒作为酶的缓释载体的连接方法  19-21
    2.4 纳米颗粒缓释载体发展前景  21
  3 以胰岛素作为药物模型的研究  21-25
    3.1 包埋型胰岛素  22-23
    3.2 交联型胰岛素  23-25
第二章实验材料和方法  25-34
  1 实验材料、试剂和仪器  25-26
    1.1 实验材料  25
    1.2 主要仪器  25-26
    1.3 主要试剂  26
  2 实验设计与方法  26-34
    2.1 液态丝素的制备  26-27
    2.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）  27
    2.3 丝素纳米颗粒的制备  27
    2.4 丝素纳米颗粒电镜观察  27
    2.5 以戊二醛为交联剂的胰岛素-丝素纳米颗粒结合物制备  27-28
    2.6 以碳二亚胺为交联剂的胰岛素-丝素纳米颗粒结合物制备  28
    2.7 丝素纳米颗粒-胰岛素结合物抗血清的制备  28-29
    2.8 丝素纳米颗粒的免疫原性实验（对流免疫电泳试验）  29-30
    2.9 胰岛素测定及标准曲线绘制  30-31
    2.10 戊二醛浓度对胰岛素修饰影响的试验  31
    2.11 交联时间对胰岛素修饰影响的试验  31
    2.12 丝素纳米颗粒浓度对胰岛素连接影响的试验  31
    2.13 抗胰蛋白酶水解试验  31-32
    2.14 体外血清半衰期试验  32
    2.15 实验性糖尿病动物模型的构建  32-33
    2.16 动物体内活性实验  33-34
第三章实验结果分析与结论  34-48
  1 实验结果分析  34-45
    1.1 丝素分子量范围的分析  34
    1.2 丝素纳米颗粒的形貌特性  34-36
    1.3 三种分子量分布范围不同的丝素纳米颗粒与胰岛素的生物连接  36
    1.4 交联剂的选择  36-37
    1.5 胰岛素标准曲线  37-38
    1.6 戊二醛浓度对胰岛素生物连接的影响  38-39
    1.7 交联时间对胰岛素固定化的影响  39
    1.8 丝素纳米颗粒与胰岛素生物连接实验条件的优化  39-40
    1.9 胰岛素生物结合物的回收率  40-42
    1.10 抗胰蛋白酶水解能力  42
    1.11 丝素纳米颗粒-胰岛素的免疫原性  42-43
    1.12 体外血清稳定性  43-45
    1.13 动物体内活性  45
  2 结论  45-48
参考文献  48-54
附录  54-56
致谢  56

胰岛素—丝素纳米颗粒结合物的生物合成及作为药物缓释系统的评价

内容摘要

全文目录

相似论文