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中国结核分枝杆菌临床分离株二线抗结核药物耐药性的初步研究

作　者: 夏强
导　师: 万康林
学　校: 南华大学
专　业: 病原生物学
关键词: 结核分枝杆菌耐药性 BACTEC MGIT 960系统 L-J固体比例法 gyr基因北京家族
分类号: R446.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:评价BACTEC MGIT 960法检测一线、二线抗结核药物敏感性的效果;初步分析结核分枝杆菌喹诺酮类药物耐药株gyr基因突变特点,探讨耐药表型与gyr基因突变的关系;用间隔区寡核苷酸分型(Spacer oligonucleotide typing,Spoligotyping)对结核分枝杆菌临床分离株进行基因分型,分析北京家族菌株与喹诺酮类药物耐药的相关性。材料和方法:1 214株结核分枝杆菌临床分离株是从中国疾病预防与控制中心传染病所结核病实验室/传染病预防控制国家重点实验室结核病组保存的结核分枝杆菌菌株库中抽取。2分别采用“世界卫生组织/国际防痨与肺部疾病联合会”推荐的比例法及世界卫生组织推荐的BACTEC MGIT 960方法,对所选菌株进行一线抗结核药物异烟肼(Isoniazid, INH)、利福平(Rifampicin, RFP)、链霉素(Streptomycin, SM)和乙胺丁醇(Ethambutol, EMB);二线抗结核药物卷曲霉素(Capreomycin, CPM)、卡那霉素(Kanamycin, KAN)、氧氟沙星(Ofloxacin ,OFLX)、乙硫异烟胺(EthionamideETH)敏感性试验,综合比较分析两种方法的结果,进行验证、评估。3采用直接测序法检测结核分枝杆菌耐药相关基因gyrA、gyrB的突变情况并分析基因突变与耐药表型及结核分枝杆菌北京基因型的关系。结果:1用BACTEC MGIT 960法与L-J固体比例法对214株结核分枝杆菌临床分离株进行药物敏感性检测,异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫异烟胺的符合率分别97.7%(209/214)、94.4%(202/214)、95.3%(204/214)、83.1%(178/214)、96.0%(205/214)、94.9%(203/214)、97.7%(209/214)和85.5%(183/214)。BACTEC MGIT 960法进行一线抗结核药物药敏试验所需时间平均8.07天,较L-J固体比例法26.27天提前18.20天,二线抗结核药物药敏试验所需时间平均为7.75天,较L-J固体比例法25.92天提前18.17天。两者间的差异具有显著统计学意义。2 214株结核分枝杆菌临床分离株中有59株对氧氟沙星耐药,其中50株为MDR-TB合并氧氟沙星耐药。耐药株中有41株gyr基因发生突变,突变率为69.5%,其中40株为MDR-TB合并氧氟沙星耐药。40株为gyrA基因突变,突变位点包括90,91和94位氨基酸;5株为gyrB基因突变,突变位点为500,506,534和539位氨基酸,4株为gyrA和gyrB基因共同突变。3 214株结核分枝杆菌临床分离株中,北京基因型和非北京基因型菌株对二线药物氧氟沙星的耐药率分别为40.21%和34.48%,两者间的差异无统计学意义(X2=0.23, P>0.05);gyrA基因的90、91、94氨基酸位点突变在结核分枝杆菌北京基因型与非北京基因型间的发生率分别为17.95%、7.69%、41.03%和10%、10%、35%,差异无统计学意义(X~2=0.43、0.18、0.67,P>0.05)。结论:1 BACTEC MGIT 960药敏方法与传统L-J固体比例法对于一线抗结核药物异烟肼、利福平和链霉素;二线药物卷曲霉素、卡那霉素和氧氟沙星的药敏检测结果具有较好的一致性,但乙胺丁醇和乙硫异烟胺的药敏检测结果一致性较低,还需进一步研究。2 BACTEC MGIT 960法所需的检测时间较短,有利于耐药结核病人的早期诊断和治疗。3结核分枝杆菌喹诺酮类药物的耐药主要与gyr基因突变有关,gyrA基因突变是gyr基因突变的主要形式。其中94、90、91位氨基酸突变特异性较高,可作为喹诺酮耐药标志,为进行喹诺酮类药物耐药的快速检测和监测提供了良好基础。4从常规耐药和gyr基因突变检测结果显示北京型MTB菌株与喹诺酮类药物耐药及耐药基因突变无明显的相关性。

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Abbreviation (缩略词)  5-6
中文摘要  6-9
ABSTRACT  9-12
前言  12-15
第一部分 BACTEC MGIT 960 法对二线抗结核药物检测效果评价  15-32
  材料与方法  15-23
  结果  23-28
  讨论  28-31
  结论  31-32
第二部分喹诺酮药物耐药基因gyrA、gyrB 突变特征分析  32-52
  材料与方法  32-38
  结果  38-47
  讨论  47-51
  结论  51-52
参考文献  52-58
已发文章  58-59
文献综述  59-68
  参考文献  65-68
致谢  68

中国结核分枝杆菌临床分离株二线抗结核药物耐药性的初步研究

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