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氨基酸类阳离子脂质体在基因转染中的应用研究

作　者: 何芳丽
导　师: 向双林
学　校: 湖南师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 基因治疗氨基酸类阳离子脂质体细胞转染
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

基因治疗作为人类遗传病和非遗传性疾病最具潜力的治疗药物已经引起了人类极大的兴趣,基因治疗的核心问题是如何提高基因药物的细胞传递效率。最近,具有良好生物相容性和生物降解性的氨基酸类阳离子脂质体,能在水相中形成易于基因药物传递的囊泡或层状结构,因此,引起了人类极大的关注。本实验合成了8种氨基酸类阳离子脂质TMA-C2-β-A1a-C12、TMA-C2-Val-C12、TMA-C2-Met-C12、TMA-C2-Gly-C12、TMA-C2-Asp-C12、TMA-C2-Glu-C8、TMA-C2-Glu-C12。这些脂质经二次蒸馏水超声分散后制得相应的氨基酸类阳离子脂质体。这些氨基酸类阳离子脂质体的转染效率通过用这些阳离子脂质携带EGFP-N1转染HEK293细胞来鉴定。结果表明,L-丙氨酸、L-缬氨酸、L-蛋氨酸和甘氨酸为基础的带有一条疏水链的阳离子脂质没有或者转染效率很低,而那些带有两条链的阳离子脂质体转染效率很高,TMA-C2-Glu-C12的转染效率比TMA-C2-Asp-C12的转染效率要高。TMA-C2-Glu-C8和未经季铵盐修饰的Glu-C12没有转染效果。实验表明具有两条疏水链、合适的疏水链长度、有连接臂和亲水性头部以及合适的氨基酸种类都是高转染效率的重要因素。用TMA-C2-Glu-C12转染15种细胞系,同时以商业化转染试剂Lipofectamine 2000做阳性对照。转染实验结果表明TMA-C2-Glu-C12的转染效率与Lipofectamine 2000相当,甚至优于Lipofectamine 2000。用MTT实验来检测TMA-C2-Glu-C12的细胞毒性,结果表明TMA-C2-Glu-C12的细胞毒性低。总之,TMA-C2-Glu-C12是一种广谱、高效、低毒的基因转运载体。

全文目录

缩略词表  3-5
摘要  5-7
ABSTRACT  7-12
第一部分前言  12-31
  1. 基因治疗发展概述  12-14
    1.1 基因治疗的发展史  12-13
    1.2 基因治疗面临的挑战与前景  13-14
  2. DNA治疗的应用概况  14-17
    2.1 质粒作用的分子基础  14-15
    2.2 质粒设计  15-16
    2.3 质粒用于基因治疗的临床应用  16-17
  3. DNA治疗药物的细胞吸收  17-19
  4. 提高DNA治疗的细胞传递战略  19-21
  5. DNA传递技术  21-29
    5.1 机械和电转技术  21
    5.2 载体辅助的输送系统  21-29
  6. 小结  29-31
第二部分材料与方法  31-41
  1. 实验材料  31-34
    1.1 仪器  31-32
    1.2 菌种与细胞  32
    1.3 质粒与工具酶  32
    1.4 试剂与药品  32-33
    1.5 试剂盒  33
    1.6 所需溶液  33-34
  2. 实验方法  34-41
    2.1 质粒的中量制备  34-37
    2.2 阳离子脂质体的制备及测定  37-38
    2.3 细胞培养  38-41
第三部分结果分析  41-61
  1. 粒径和电位测定  41-48
    1.1 阳离子脂质体纳米粒子的粒径和表面电位测定  41-43
    1.2 脂质体/DNA复合物的粒径和表面电位测定  43-48
  2. 阳离子脂质体对细胞的转染效率评定  48-60
    2.1 脂质体TMA-C2-Asp-C12对细胞的转染效率评定  49
    2.2 脂质体TMA-C2-Glu-C12对细胞的转染效率评定  49-60
  3. TMA-C2-GLU-C12阳离子脂质体对细胞毒性的测定  60-61
第四部分讨论与展望  61-64
参考文献  64-77
附录  77-78
致谢  78-80

氨基酸类阳离子脂质体在基因转染中的应用研究

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