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Ad-ING4-IL-24双基因共表达对肺癌的抑癌增效和化疗增敏的体外实验研究

作　者: 梁光辉
导　师: 赵军
学　校: 苏州大学
专　业: 外科学
关键词: 腺病毒 ING4 IL-24 肺癌 基因治疗 化疗增敏
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:研究肿瘤生长抑制因子4(ING4)和人白细胞介素24(IL-24)双基因共表达腺病毒载体(pAd-ING4-polyA+promoter-IL-24)体外对肺癌细胞株NCI-H460的抑癌增效和化疗增敏效应及其分子机制。方法:采用本室已构建的携带ING4/IL-24双基因共表达的重组复制缺陷型腺病毒载体pAd-ING4-polyA+promoter-IL-24(简称Ad-ING4-IL-24)感染QBI-293A细胞,并用该细胞进行病毒扩增和效价测定。将Ad-ING4、Ad-IL-24、Ad-ING4-IL-24感染NCI-H460肺癌细胞后,运用RT-PCR及Western blot检测ING4、IL-24基因在NCI-H460细胞中的转录及表达;MTT法和FCM双染法检测PBS、Ad-GFP、Ad-ING4、Ad-IL-24、Ad-ING4-IL-24、DDP及Ad-ING4-IL-24联合DDP体外抑制肺癌细胞NCI-H460生长和诱导凋亡的抑癌增效和化疗增敏效应;流式细胞术PI单染法检测Ad-ING4-IL-24等对NCI-H460细胞周期的影响;运用半定量RT-PCR检测分析Ad-ING4-IL-24对NCI-H460细胞抑癌增效和化疗增敏效应可能的分子机制。Western blot检测肺癌细胞中的细胞凋亡执行蛋白Caspase-3的表达。结果:Ad-ING4-IL-24可在QBI-293A细胞中增殖,48h后在倒置显微镜下可见细胞变圆,呈葡萄状聚集,倒置荧光显微镜下可见绿色荧光,呈现高感染效率。RT-PCR和Western blot检测证实腺病毒介导的ING4和/或IL-24双基因可以在NCI-H460细胞中稳定转录及表达;Ad-ING4-IL-24体外不仅能明显抑制NCI-H460肺癌细胞的生长,引起G2/M期阻滞和诱导细胞凋亡,而且还显著优于Ad-ING4、Ad-IL-24单基因组(P<0.05),并呈现抑癌增效的叠加作用。Ad-ING4-IL-24能提高DDP化疗药物体外抑制NCI-H460肺癌细胞的生长和诱导凋亡的作用,具有显著的化疗增敏效应。分子机制检测结果表明:Ad-ING4-IL-24能明显上调NCI-H460肺癌细胞Bax、Caspase-3和下调Bcl-2、Survivin等细胞周期和凋亡相关基因的表达;且其效应均较Ad-ING4、Ad-IL-24单基因更为显著。结论:1、腺病毒载体Ad-ING4-polyA+promoter-IL-24可以有效地介导外源性ING4和IL-24双基因在NCI-H460肺癌细胞中的表达。2、Ad-ING4-IL-24双基因共表达体外不仅能抑制NCI-H460肺癌细胞生长和诱导其凋亡而且显著优于Ad-ING4、Ad-IL-24单基因组(P<0.05),呈现明显的抑癌增效作用;3、Ad-ING4-IL-24双基因共表达联合化疗药物DDP体外呈现明显的化疗增敏效应,Ad-ING4-IL-24可成为肺癌的化疗增敏剂。4、腺病毒介导的ING4和IL-24双基因共表达(Ad-ING4-IL-24)较Ad-ING4、Ad-IL-24更显著上调Bax、Caspase-3和下调Bcl-2、Survivin等细胞周期和凋亡相关基因的表达,可能是其对肺癌细胞生长具有抑癌增效作用的重要机制之一。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-9
引言  9-14
  参考文献  11-14
第一部分 Ad-ING4-IL-24 的构建策略、病毒扩增和效价测定  14-26
  材料和方法  14-21
  结果  21-22
  讨论  22-24
  参考文献  24-26
第二部分 Ad-ING4-IL-24 双基因共表达对NCI-H460 肺癌细胞生长抑制效应的体外实验研究  26-48
  材料与方法  26-32
  结果  32-41
  讨论  41-44
  参考文献  44-48
第三部分 Ad-ING4-IL-24 双基因共表达对NCI-H460 肺癌细胞化疗增敏的体外实验研究  48-59
  材料与方法  48-50
  结果  50-55
  讨论  55-57
  参考文献  57-59
结论  59-60
综述：白细胞介素24 抗肿瘤治疗的研究进展  60-71
  参考文献  66-71
缩略词语  71-72
攻读学位期间公开发表的文章  72-73
致谢  73-74

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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