学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

聚乙烯亚胺修饰糖脂共聚物介导基因治疗研究

作　者: 陈万威
导　师: 胡富强
学　校: 浙江大学
专　业: 药剂学
关键词: 壳寡糖硬脂酸嫁接物 聚乙烯亚胺 聚合物胶束 基因传递系统 基因转染 基因治疗 非病毒基因载体
分类号: R450
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 11次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


中文摘要本研究选择具有低毒性、可生物降解和生物相容性的壳聚糖作为主要材料,构建壳聚糖衍生物/DNA复合物纳米粒基因给药系统,以期实现体内外高效的基因转染和体内有效抗肿瘤基因治疗。采用生物酶降解法制备得到分子量为17.5 KDa的壳寡糖,以碳二亚胺为偶合剂合成壳寡糖硬脂酸嫁接物(chitosan oligosaccharide grafted stearic acid, CSOSA)。硬脂酸修饰比例为3.46%和20.7%的嫁接物,其在水中的临界胶束浓度分别为0.120 g/L和0.091 g/L。以荧光质粒DNA(pEGFP-C1)为报告基因,考察CSOSA胶束密接DNA前后粒径与表面电位的变化、对DNA密接能力和保护DNA免受核酶降解的能力。以LipofectamineTM2000为对照,CSOSA/pDNA复合物基因转染研究表明,嫁接物介导的细胞转染效率受血清、精氨酸等因素的影响。细胞毒性研究表明,CSOSA嫁接物的细胞毒性明显小于脂质体。采用高碘酸法,合成的小分子量PEI修饰共聚物(Polyethylenimine conjugated stearic acid-g-chitosan oligosaccharide, CSOSA-g-PEI),其离子缓冲能力显著提高,与质粒DNA复合形成的纳米粒粒经为100-200 nm。凝胶电泳阻滞分析显示,共聚物具有密接、压缩质粒DNA的能力,同时共聚物可以保护DNA不被核酶降解。共聚物在MCF-7和HeLa细胞系的IC50分别为400μg/ml和450μg/ml,细胞毒性均明显小于LipofectamineTM 2000。体外细胞转染实验发现,共聚物载GFP质粒于转染后48h有大量绿色荧光蛋白表达(转染率达到30.6%),且72h有所增加。随着共聚物/DNA的复合比例的增加,细胞转染水平呈现先升后降现象,且在质量比80左右达到最大值。在血清和精氨酸存在条件下,CSOSA-g-PEI/pDNA复合物的细胞转染水平有显著的提高,与LipofectamineTM 2000阳性对照相当。体内抗肿瘤动物实验结果表明,共聚物介导的治疗基因给药系统可有效地抑制肿瘤地生长(抑瘤率为62.34%)。治疗期间,观察动物体重,发现共聚物/PEDF质粒给药组的体重和阴性对照组没有显著性差别。而化疗药组的抑瘤率为79.73%,但显示了较强的毒性。

全文目录


致谢  4-5中文摘要  5-7Abstract  7-12引言  12-141 壳寡糖硬脂酸嫁接物的制备及理化性质评价  14-24  1.1 试剂与仪器  14    1.1.1 试剂  14    1.1.2 仪器  14  1.2 实验方法  14-16    1.2.1 壳寡糖的制备及分子量的测定  14-15    1.2.2 壳寡糖硬脂酸嫁接物的制备  15    1.2.3 嫁接物的结构鉴定  15    1.2.4 嫁接物氨基取代度的测定  15-16    1.2.5 嫁接物临界胶束浓度的测定  16    1.2.6 嫁接物胶束粒径与表面电位的测定  16    1.2.7 细胞摄取实验  16  1.3 结果与讨论  16-22    1.3.1 壳寡糖硬脂酸嫁接物的合成及结构鉴定  16-17    1.3.2 嫁接物的氨基取代度  17-18    1.3.3 嫁接物的临界胶束浓度  18-19    1.3.4 嫁接物胶束的粒径与表面电位  19-20    1.3.5 嫁接物细胞摄取能力  20-22  1.4 小结  22-242 壳寡糖硬脂酸嫁接物胶束/pDNA基因给药系统研究  24-36  2.1 试剂与仪器  24-25    2.1.1 试剂  24    2.1.2 仪器  24-25  2.2 实验方法  25-26    2.2.1 嫁接物胶束/pDNA纳米粒的制备  25    2.2.2 嫁接物胶束/pDNA纳米粒粒径与表面电位的测定  25    2.2.3 嫁接物胶束/pDNA纳米粒的原子力显微观察  25    2.2.4 嫁接物胶束/pDNA纳米粒凝胶阻滞分析  25    2.2.5 嫁接物胶束/pDNA纳米粒核酶稳定性考察  25-26    2.2.6 胞培养与细胞毒性实验  26    2.2.7 嫁接物胶束/pDNA纳米粒体外细胞转染  26    2.2.8 嫁接物胶束/pDNA纳米粒体外细胞转染率的测定  26  2.3 结果与讨论  26-33    2.3.1 嫁接物胶束/pDNA纳米粒的粒径与表面电位  26-27    2.3.2 嫁接物胶束/pDNA纳米粒的形态  27-29    2.3.3 嫁接物胶束密接质粒DNA能力  29    2.3.4 嫁接物胶束/pDNA纳米粒对核酶的稳定性  29-30    2.3.5 嫁接物胶束/pDNA纳米粒对不同细胞系的细胞毒性  30-31    2.3.6 嫁接物胶束/pDNA纳米粒的体外转染  31-32    2.3.7 精氨酸对基因载体体外转染的影响  32-33  2.4 小结  33-363 PEI修饰糖脂共聚物胶束/pDNA纳米粒制备及其理化性质研究  36-50  3.1 试剂与仪器  36    3.1.1 试剂  36    3.1.2 仪器  36  3.2 实验方法  36-39    3.2.1 PEI修饰共聚物的合成  37    3.2.2 PEI修饰共聚物结构鉴定  37    3.2.3 细胞摄取实验  37    3.2.4 PEI修饰共聚物胶束/pDNA纳米粒制备  37    3.2.5 PEI修饰共聚物胶束/pDNA纳米粒粒径与表面电位的测定  37    3.2.6 PEI修饰共聚物离子缓冲能力的考察  37-38    3.2.7 PEI修饰共聚物胶束/DNA纳米粒凝胶阻滞分析  38    3.2.8 PEI修饰共聚物胶束/pDNA纳米粒核酶稳定性考察  38    3.2.9 细胞培养与细胞毒性实验  38-39  3.3 结果与讨论  39-47    3.3.1 PEI修饰嫁接物的合成及结构  39-41    3.3.2 共聚物细胞摄取能力  41-43    3.3.3 PEI修饰共聚物胶束/pDNA纳米粒的粒径与表面电位  43-44    3.3.4 PEI修饰共聚物离子缓冲能力  44    3.3.5 PEI修饰嫁接物胶束密接DNA能力  44-45    3.3.6 PEI修饰共聚物胶束/pDNA纳米粒的稳定性  45-46    3.3.7 细胞毒性  46-47  3.4 小结  47-504 PEI修饰糖脂共聚物胶束介导基因转染及体内抗肿瘤治疗研究  50-60  4.1 试剂与仪器  50    4.1.1 试剂  50    4.1.2 仪器  50  4.2 实验方法  50-52    4.2.1 细胞培养  50-51    4.2.3 共聚物胶束/DNA纳米粒体外细胞转染  51    4.2.4 细胞转染率的测定  51    4.2.5 共聚物胶束/pDNA纳米粒体外细胞转染水平的测定  51-52    4.2.6 共聚物胶束/DNA基因给药系统体内治疗评价  52  4.3 结果与讨论  52-58    4.3.1 荧光倒置显微镜观察细胞转染及体外转染效率测定  52-54    4.3.2 PEI修饰共聚物胶束/pDNA纳米粒的体外转染  54-55    4.3.3 血清对基因载体体外转染的影响  55-56    4.3.4 精氨酸对基因载体体外转染的影响  56-57    4.3.5 共聚物胶束/pDNA基因给药系统体内治疗评价  57-58  4.4 小结  58-60结论  60-62参考文献  62-66综述  66-82  参考文献  78-82

相似论文

  1. 山羊骨髓间充质干细胞生物学特性、冷冻保存及基因转染研究,S827
  2. 新型非病毒基因转染体系的构建及其在骨髓间充质干细胞基因重组中的应用,R346
  3. 恩诺沙星缓释制剂的制备及其药物动力学研究,R96
  4. pIRES2-EGFP-hIL-12-HSP70真核表达载体的构建及对7402肝癌细胞生长的影响,R346
  5. 结合使用“鸡尾酒”疗法在提升自体脂肪移植于颜面整型手术的效果研究,R622
  6. 多灶性甲状腺乳头状癌的临床分析,R736.1
  7. 人TLT-2基因转染细胞株的构建及其单克隆抗体的研制,R392
  8. 脂质体介导的VEGF-C siRNA治疗肺癌体外实验研究,R734.2
  9. Ad-ING4-IL-24双基因共表达对肺癌的抑癌增效和化疗增敏的体外实验研究,R734.2
  10. 生物可降解聚合物纳米药物载体用于癌症的靶向联合治疗,R730.5
  11. 温度敏感型纳米载体的构建与评价,R943
  12. 携带hIL12-p40-L△p35的双靶向溶瘤腺病毒联合CIK细胞的抗癌作用研究,R730.5
  13. 球形多孔材料及其改性对二氧化碳的吸脱附行为研究,X51
  14. 下调MSI2基因对k562细胞BCR-ABL融合基因表达的影响,R55
  15. SOCS3基因转染延长同种异体小鼠心脏移植物生存时间及其机制,R654.2
  16. 选择复制性腺病毒M4对卵巢癌细胞系体外治疗作用及机制的初步探讨,R737.31
  17. 微泡造影剂与共聚物P85联合超声辐照对HepG2细胞基因转染的影响,R735.7
  18. 脉冲电场介导AT2R基因在血管局部表达及其对血管新生内膜影响,R541.4
  19. 肝靶向半乳糖化棕榈酰壳聚糖聚合物胶束作为药物载体的研究,R943
  20. mPEG-CS纳米粒介导的livin和survivin双基因干扰对大肠癌细胞杀伤效率的研究,R735.34

中图分类: > 医药、卫生 > 临床医学 > 治疗学
© 2012 www.xueweilunwen.com