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HBV能够通过增强Raf1的启动子活性提高其在HepG2.2.15细胞中的表达

作　者: 田园园
导　师: 汤华
学　校: 重庆医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: HBV Raf1 表达 HCC
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 26次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的研究HBV对肝癌细胞中Raf1表达的影响,并对其作用机制进行初步探讨,为揭示HBV相关的HCC的发生机制提供一种新的思路。方法1.用RT-PCR和Western blot检测Raf1在HepG2细胞和HepG2.2.15细胞中的表达差异。2.构建Raf1基因的启动子虫荧光素酶报告质粒,将构建好的启动子虫荧光素酶报告质粒转染HepG2细胞检测启动子活性,然后将启动子虫荧光素酶报告质粒分别与HBV表达质粒共转染HepG2细胞,利用双荧光素酶报告系统,检测HBV对启动子活性的影响;利用Western blot检测HBV对Raf1蛋白表达的影响。3.将构建好的HBs、HBp、HBc及HBx表达质粒,分别与Raf1启动子虫荧光素酶报告质粒共转染HepG2细胞,利用双荧光素酶报告系统,检测HBV哪种蛋白对启动子活性影响最明显。并进一步利用Western blot检测上述蛋白对Raf1蛋白表达的影响。4.设计干扰质粒,干扰HBV中对启动子活性影响最为明显的蛋白的表达。将设计好的干扰质粒转染HepG2.2.15,利用RT-PCR检测干扰质粒的干扰效果;利用Western blot检测干扰质粒对Raf1表达的影响。结果1. RT-PCR结果显示,Raf1在HepG2.2.15细胞中的表达量是其在HepG2细胞中的2.16倍,Western blot结果显示Raf1在HepG2.2.15细胞中的表达量比其在HepG2细胞中表达量明显增加。2.成功构建了Raf1启动子的虫荧光素酶报告质粒,证明了该启动子有明显活性。将Raf1启动子的虫荧光素酶报告质粒与HBV表达质粒共转HepG2细胞时,发现HBV能提高荧光素酶活性4.65倍(与对照相比)。3.用HBV四种表达蛋白与Raf1转染转HepG2细胞时,发现HBs和HBx对Raf1启动子活性影响最为明显,相对荧光素酶活性分别是对照组的3.62倍和2.92倍,而HBc、HBp对启动子活性没有影响。与此同时,Western blot检测也发现转染了HBs和HBx表达质粒转HepG2细胞时中,Raf1的蛋白表达水平与对照组相比明显增加。4.转染了HBs和HBx干扰质粒的HepG2.2.15细胞中HBs和HBx的表达量明显下降,且此两种质粒分别转染时,对其余三种蛋白的表达没有影响。Western blot检测证明转染了HBs和HBx干扰质粒后,Raf1的蛋白表达水平明显与对照组相比明显降低。结论HBV能通过增强Raf1启动子活性增加其在HepG2.2.15细胞中的表达,其中HBs和HBx蛋白起主要作用。本研究揭示了HBV引起HCC的一种新的途径,为治疗HBV相关的HCC提供新的建议。

全文目录


英汉缩略语名词对照  5-8
中文摘要  8-11
英文摘要  11-14
前言  14-18
  参考文献  15-18
第一部分Raf1 在HepG2 和HepG2.2.15 细胞中的表达差异  18-29
  1 材料与方法  18-25
  2 结果  25-27
  3 讨论  27
  参考文献  27-29
第二部分HBV 对Raf1 启动子活性的影响  29-48
  1 材料与方法  29-42
  2 结果  42-46
  3 讨论  46-47
  参考文献  47-48
第三部分 HBV 四种蛋白分别对Raf1 启动子活性的影响  48-52
  1 材料与方法  48-50
  2 结果  50-51
  3 讨论  51-52
第四部分 干扰HBs、HBx 后对Raf1 表达量的影响  52-60
  1 材料与方法  52-56
  2 结果  56-58
  3 讨论  58-60
全文总结  60-62
参考文献  62-63
文献综述  63-70
  参考文献  66-70
致谢  70-71
攻读学位期间发表的学术论文  71

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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