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捻转补泻手法对应激性高血压大鼠下丘脑NOS-1、CGRP、ET-1基因表达的影响

作　者: 陈思思
导　师: 刘清国
学　校: 北京中医药大学
专　业: 针灸推拿学
关键词: 基因表达捻转补泻/针刺手法太冲穴下丘脑一氧化氮合酶/降钙素基因相关肽/内皮素
分类号: R245
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的本研究以应激性高血压(stress-induced hypertension, SIH)大鼠模型为研究对象,运用荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)和蛋白印迹(WB)技术,观察针刺“太冲”穴,施以捻转补法和泻法对应激性高血压大鼠下丘脑中神经细胞型一氧化氮合酶(NOS-1)、降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素1型(ET-1)基因表达和蛋白表达的影响,探讨捻转补法与泻法对SIH大鼠血压及血管内皮相关因子表达的差异,从中枢系统调控血管内皮功能角度分析捻转补泻手法降压的途径,为针刺捻转补泻手法的有效性、差异性提供客观依据,为针刺治疗高血压的机制途径提供实验依据。方法清洁级雄性Wistar大鼠60只,随机分为5组：空白组、造模组、针刺不手法组、捻转补法组和捻转泻法组。空白组不做处理,其他各组采用电击加噪声刺激制成应激性高血压模型,并在造模前1d,造模第3、6、.9、12、15d的造模刺激后2h测量大鼠收缩压(SBP)。造模完成后,对针刺不手法组进行两侧“太冲”穴针刺治疗,不行补泻手法；对捻转补法组和捻转泻法组进行两侧“太冲”穴针刺治疗,并分别施以捻转补法和捻转泻法,空白组和造模组进行相同的捉抓。每次手法操作持续1 min,留针20 min,每天1次,共治疗7d。治疗结束后测量各组大鼠收缩压,随后断头处死,取下丘脑,用Q-PCR和WB方法分别检测下丘脑中NOS-1、CGRP、ET-1的基因和蛋白表达情况。结果1各组大鼠收缩压的变化造模前各组血压之间无显著差异(p>0.05)。造模15d结束后,与空白组比较,进行造模的四组收缩压明显升高,差异具有统计学意义(p<0.01)。进行造模的四组血压值之间,差异无统计学意义(p>0.05)。针刺7d结束后,空白组与造模前、造模后收缩压变化无显著差异(p>0.05)；造模组的血压仍较高,与空白组比较有显著差异(p<0.01),与造模前有显著差异(p<0.01),与造模后无显著差异(p>0.05)；针刺不手法组和捻转泻法组针刺后血压下降,与造模前无显著差异(p>0.05),与造模后有显著差异(p<0.01)；针刺不手法组比捻转泻法组血压高,两组有显著差异(p<0.05)；捻转补法组在针刺后血压下降,但血压高于造模前(p<0.01),低于造模后(p<0.01)。2各组大鼠下丘脑中NOS-1基因和蛋白表达情况造模组、针刺不手法组下丘脑中NOS-1 mRNA的表达偏低,与空白组比较有显著差异(p<0.05),捻转泻法组与空白组比较有极显著差异(p<0.01),与捻转补法组比较有显著差异(p<0.05)。而捻转补法组与空白组比较没有显著差异(p>0.05)。造模组、针刺不手法组、捻转补法组和捻转泻法组的大鼠下丘脑中NOS-1表达下调,与空白组有显著差异(p<0.01)。其中造模组、针刺不手法组的表达水平明显低于捻转补法组和捻转泻法组(p<0.01)；捻转泻法组的表达水平明显低于捻转补法组(p<0.01)。3各组大鼠下丘脑中CGRP基因和蛋白表达情况各组间大鼠下丘脑中CGRP mRNA的表达无显著差异(p>0.05)。空白组的大鼠下丘脑中CGRP的表达明显低于造模组、针刺不手法组、捻转补法组和捻转泻法组,差异有统计学意义(p<0.01)。造模组的大鼠下丘脑中CGRP的表达明显低于针刺不手法组、捻转补法组和捻转泻法组,差异有统计学意义(p<0.01)。针刺不手法组的大鼠下丘脑中CGRP的表达明显低于捻转补法组和捻转泻法组,差异有统计学意义(p<0.01)。同时,捻转补法组与捻转泻法组也有显著差异(p<0.01)。4各组大鼠下丘脑中ET-1基因和蛋白表达情况各组间大鼠下丘脑中ET-1 mRNA的表达无显著差异(p>0.05)。造模组、针刺不手法组、捻转补法组和捻转泻法组的大鼠下丘脑中ET-1表达水平与空白组有显著差异(p<0.01);造模组和捻转补法组表达水平低于针刺不手法组和捻转泻法组,差异有统计学意义(p<0.01)。结论1电击足底结合噪音刺激可有效建立应激性高血压大鼠模型。应激性高血压大鼠下丘脑中,NOS-1基因和蛋白的表达下调；CGRP和ET-1的基因表达未见明显变化,不排除检测时间错过高拷贝时间的因素；CGRP表达增加,ET-1表达下降,可能发挥着代偿性降压作用。2针刺“太冲穴”可有效降低应激性高血压大鼠收缩压。降压效果以施于捻转泻法最佳,单纯针刺效果次之,施于捻转补法效果再次。3以不同手法针刺“太冲”穴,其降压机制可能不同。捻转泻法的降压途径可能与下丘脑中CGRP的关系较为密切,而与NOS-1和ET-1无直接关系；捻转补法的降压途径与下丘脑中NOS-1的关系较为密切,与CGRP和ET-1有一定关系。4以“左旋为补,右旋为泻”的捻转补泻手法确实存在效应上差异,表明以“左旋为补,右旋为泻”确定捻转补泻手法是有效的。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
英文缩略语简表  9-10
第一部分文献综述  10-31
  综述一捻转补泻手法历史源流与发展现状  10-22
    参考文献  18-22
  综述二针刺治疗高血压病的发展概况  22-31
    参考文献  27-31
第二部分实验研究  31-50
  前言  31-32
  材料与方法  32-38
    1 实验材料  32-33
    2 实验方法  33-34
    3 指标检测  34-37
    4 数据处理  37-38
  实验结果  38-44
    1 造模后应激性高血压大鼠的观察  38
    2 各组大鼠收缩压的变化  38-39
    3 各组大鼠下丘脑中NOS-1、CGRP、ET-1 mRNA表达的定量分析  39-41
    4 各组大鼠下丘脑中NOS-1、CGRP、ET-1表达的分析  41-44
  讨论  44-50
    1 高血压的中医认识  44-45
    2 应激反应与应激性高血压  45-46
    3 应激性高血压模型的病理基础  46
    4 太冲穴对高血压病的治疗作用  46-47
    5 捻转补泻手法对应激性高血压大鼠血压调节的机理分析  47-49
    6 捻转补泻法与补泻效应的相关性分析  49-50
小结  50-51
参考文献  51-54
致谢  54-55
个人简历  55

捻转补泻手法对应激性高血压大鼠下丘脑NOS-1、CGRP、ET-1基因表达的影响

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