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大萼香茶菜甲素体外诱导白血病细胞株HL-60的分化和凋亡

作　者: 吴建国
导　师: 夏大静
学　校: 浙江大学
专　业: 免疫学
关键词: 大萼香茶菜甲素白血病细胞凋亡细胞分化
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的:研究大萼香茶菜甲素(MA)抑制白血病细胞株HL-60增殖,诱导细胞分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:将不同浓度的MA与HL-60细胞在体外培养,台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析细胞凋亡;通过细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14,NBT试验和细胞形态学检测MA对HL-60细胞的分化作用;流式细胞术检测Bcl-2、Bax、P53、Fas和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位(Δψm)的表达变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、P53、caspase-3 mRNA变化。结果:MA呈时效及量效性地抑制HL-60细胞的增殖和活力,8μg/ml MA作用HL-60细胞24～72h后,MTT法检测24h、48h、72h的细胞增殖抑制率分别为(52.9±0.3)%、(70.0±1.0)%和(75.3±1.2)%,均显著高于对照组(P＜0.01);24h、48h、72h的IC50分别为8.76、7.17、7.14μg/ml;HL-60细胞经MA作用后,大部分细胞阻滞于G0/1期,DNA片段化,出现典型的细胞形态改变,经4～20μg/ml的MA作用后,SubG1由(2.85±1.6)%上升至(51.7±5.9)%,与对照组(1.74±0.5)%相比具有显著性差异(P＜0.05),Annexin-V/PI标记升高,Hoechst染色后的凋亡细胞的特征性改变等均表明MA能诱导HL-60细胞凋亡;HL-60细胞经4-8μg/ml MA作用24h后,细胞发生部分分化,细胞表面CD11b表达增加,NBT阳性细胞增多。MA诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中,Bcl-2表达无变化,但Bax表达显著增加,Bax/Bcl-2的比值升高,Fas、P53表达无变化。随MA作用的浓度增加,caspase-3表达升高、线粒体膜电位(Δψm)下降、而线粒体膜蛋白表达显著升高。结论:MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导HL-60细胞向粒系分化、促进细胞凋亡,其机制与上调bax基因和bax/bcl-2比值、caspase-3激活与线粒体膜电位显著下降等有关。

全文目录

一、中文摘要  3-5
二、英文摘要  5-7
三、前言  7-10
四、材料与方法  10-16
五、结果  16-25
六、讨论  25-28
七、参考文献  28-32
八、综述  32-47
九、攻读学位期间发表论文  47-48
十、致谢  48

大萼香茶菜甲素体外诱导白血病细胞株HL-60的分化和凋亡

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