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炔雌醇、炔诺酮和左炔诺孕酮对拟南芥根生长的影响及三种激素ELISA的建立

作　者: 杨怡
导　师: 夏凯
学　校: 南京农业大学
专　业: 植物学
关键词: 甾类激素 拟南芥 根生长 免疫原 多克隆抗体 ELISA
分类号: X173
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


人工合成甾类激素在医学上广泛应用于避孕药的合成和疾病的治疗，在牲畜、水产养殖中作为动物的生长促进剂。近年来大量甾类激素释放进入环境，因此医院、药厂和养殖厂附近的河流成为重要的污染源，许多国家河流中都检测出人工合成甾类激素的存在。该文研究了甾类激素炔雌醇（EE2）、炔诺酮（NOR）和左炔诺孕酮（LNG）对拟南芥幼苗根生长的影响。结果表明：1)30μg·L-1EE2处理显著促进主根的伸长，促进侧根数及侧根总长的增加，促进主根根毛数和地下部鲜重的增加，且还增加内源IAA和iPAs含量，增大IAA／iPAs比值；3000μg·L-1EE2处理则增加主根的弯曲度。2)NOR活性相对较弱，浓度为300μg·L-1时对主根长、侧根数、侧根总长的促进效果最大，IAA含量增加，而iPAs含量降低，IAA／iPAs比值最大；3000μg·L-1NOR则引起主根弯曲，抑制根毛的生长，但促进侧根数的增加，增加地下部鲜重。3)LNG的活性较高，3μg·L-1时对拟南芥主根长、主根根毛数增大最为显著，300μg·L-1时对侧根数、根毛密度的增幅最大，IAA含量增加，IAA／iPAs比值最大；3000μg·L-1时显著抑制主根的生长和侧根的生成。由此表明，环境中的甾类激素可以改变植物体内的内源激素水平来影响植物根的生长发育，进而影响植物的生长习性及生理功能。甾类激素的检测方法中有分光光度法、液相色谱法、薄层层析法及免疫检测法等多种，其中以近几年发展起来的免疫检测法较为方便快捷。甾类激素不能直接用于人工抗原的合成，必须加以修饰形成含羧基的物质才能偶联，合成人工抗原以便产生抗体。本实验将EE2、NOR和LNG改造成含羧基的中间产物，再采用碳二亚胺法及混合酸酐法将中间产物与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）共价偶联，合成免疫抗原EE2-BSA、NOR-BSA、LNG-BSA和包被抗原EE2-OVA、NOR-OVA、LNG-OVA，合成的人工抗原通过紫外光谱法进行鉴定，并计算出蛋白质半抗原偶联比率分别为1：18（EE2-BSA）、1：16（NOR-BSA）、1：20（LNG-BSA）、1：10（EE2-OVA）、1：8（NOR-OVA）、1：10（LNG-OVA）。用合成的抗原免疫新西兰大白兔，制备的抗血清经ELISA法测定抗体效价分别为1：12800（兔E1）、1：3200（兔E2）、1：6400（兔N1）、1：12800（兔N2）、1：6400（兔L1）、1：12800（兔L2）。交叉反应率低于1％。建立了检测EE2、NOR、LNG的竞争抑制性ELISA方法，其灵敏度为0.003 nmol、0.018 nmol、0.003 nmol，检测范围为0.064-200 nmol、0.32-1000 nmol、0.064-200 nmol。

全文目录


中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
缩略语  10-11
第一部分 文献综述  11-23
  1 人工合成药用甾类激素种类及带来的全球性问题  11-13
  2 人工合成药用雌激素的危害  13-15
  3 食品和环境中人工合成药用雌激素残留的检测技术  15-18
  4 人工合成药用雌激素的迁移、转化与降解  18-19
  5 展望  19
  参考文献  19-23
第二部分 研究部分  23-50
  第一章 甾类激素炔雌醇、炔诺酮和左炔诺孕酮对拟南芥根生长的影响  23-31
    1 材料与方法  23-24
      1.1 供试药品  23
      1.2 材料及培养方法  23-24
      1.3 生长素 (IAA) 和异戊烯基腺苷 (iPAs) 的 ELISA 测定  24
      1.4 数据分析  24
    2 结果分析  24-29
      2.1 EE2、NOR 和 LNG 对拟南芥根生长的影响  24-26
      2.2 EE2、NOR 和 LNG 对拟南芥地下部鲜重的影响  26-27
      2.3 EE2、NOR 和 LNG 对拟南芥内源激素水平的影响  27-29
    3 讨论  29
    参考文献  29-31
  第二章 甾类激素炔雌醇、炔诺酮和左炔诺孕酮的 ELISA 检测方法的建立  31-50
    1 材料和方法  32-36
      1.1 试剂与仪器  32
      1.2 试验动物  32
      1.3 试验方法  32-35
      1.4 数据分析  35-36
    2 结果与分析  36-46
      2.1 免疫原与包被物的鉴定  36-37
      2.2 最佳抗体工作浓度和抗原包被物浓度的选择  37-38
      2.3 抗血清的效价测定  38-40
      2.4 抗血清的特异性  40
      2.5 标准曲线  40-42
      2.6 精确度  42-45
      2.7 回收率  45
      2.8 水产品、鸡蛋和蔬菜中 EE2、NOR 和 LNG 含量的测定  45-46
    3 讨论  46-47
    参考文献  47-50
全文结论  50-51
致谢  51

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中图分类: > 环境科学、安全科学 > 环境科学基础理论 > 环境生物学 > 环境植物学
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