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5-氟胞嘧啶热化疗对鼠结肠癌肝转移治疗机理研究

作　者: 张宝明
导　师: 王烈；黎成金
学　校: 福建中医学院
专　业: 中西医结合临床
关键词: 结肠癌癌胚抗原基因治疗胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶黄芪注射液凋亡
分类号: R735.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

大肠癌是常见的恶性肿瘤之一,传统的治疗方法包括手术、放疗、化疗,疗效并不令人满意,患者的生活质量及远期存活率均有待提高。影响大肠癌术后生存率的最主要原因是癌细胞的远处转移,尤其是肝转移。前期实验已经证实CD/5-FC系统的作用,而且联合温热疗法作用更明显。恶性肿瘤的发生、发展与机体防御功能衰退,尤其细胞免疫功能低下有关,而生长的肿瘤又会加重机体免疫功能的抑制,从而助长了肿瘤的发展。另外,由于化疗药物的毒性和非选择性,往往对病人造成很大的损害,不但对病人的心、肝、肾、骨髓等重要器官造成损害,同时抑制了病人的免疫功能。中医认为,大肠癌是由机体正气不足、湿毒瘀滞凝结而致病,术后可致气虚血瘀。中医通过调整机体,平衡阴阳,提高机体免疫功能,清除微小的转移灶,抑制肿瘤的转移和复发。在中西医结合治疗肿瘤的研究中,一些传统中药,如:黄芪、天花粉、女贞子等,在临床抗肿瘤应用中积累了许多经验。黄芪注射液是临床常用的黄芪制剂,其主要成分为黄芪苷、多糖、氨基酸、生物碱、黄酮类似物及铁、锰、锌、硒等多种微量元素,能双向调节免疫功能,是一种免疫调节剂。在以往研究中对其增强机体免疫,抑制接种肿瘤生长,体外培养生长抑制等方面做过不同程度探索,取得了一定的肯定结果,但对其抗肿瘤疗效未能做满意评价,同时其抗肿瘤机理也未完全清晰。目的1细胞实验通过观察黄芪注射液对体外培养的人结肠癌Lovo细胞的生长抑制作用及对细胞周期、细胞凋亡的影响,探讨黄芪注射液抗肿瘤的作用机制。2动物实验探讨CD/5-FC系统热化疗对裸鼠结肠癌肝转移的靶向性。方法1细胞实验以不同浓度的黄芪注射液作用于人结肠癌Lovo细胞株,MTT法测黄芪注射液对Lovo细胞体外增殖的影响,透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞仪AnnexinV和PI双重染色行凋亡相关检查。2动物实验脂质体法转CD基因至人结肠癌Lovo细胞株,45只BALB/c裸鼠,随机分为3组,每组15只,即:对照组、前药治疗组及前药前药热疗组。经门静脉注射转CD基因Lovo细胞（0.2 ml,10⁷/ml）后,3组分别经腹腔注射42℃生理盐水、38℃5-FC和42℃5-FC,5-FC剂量为500 mg/（kg·d）。治疗21 d后,待动物自然死亡,观察自然生存期、肝脏转移率、肝脏转移结节数,并切取肝脏转移瘤组织、正常肝组织、胃、肺、胰腺、小肠、大肠组织,行RT-PCR检测各组织CD基因表达,观察各组织病理学变化、肿瘤细胞凋亡指数。结果1细胞实验与对照组相比,实验组对Lovo细胞株增殖均有明显的抑制作用,且与浓度和作用时间呈正比;电镜下可见凋亡的早、中、晚期细胞及凋亡小体,同时可见部分细胞呈坏死改变。流式细胞仪显示:黄芪注射液作用Lovo细胞48 h后,0.05 g/ml、0.1 g/ml、0.15 g/ml、0.2 g/ml各组的凋亡率分别为4.8%、18.6%、42.1%、64.8%。2动物实验目的基因在肝脏转移瘤组织中有效表达,正常肝组织、胃、肺、胰腺、小肠、大肠组织中无表达。三组自然生存期分别为（25.80±3.6489）,（34.27±4.0780）,（41.87±3.9073）d;肝脏转移率分别为100.0%（15/15）、40.0%（6/15）、13.3%（2/15）;平均肝脏转移结节数分别为（2.93±1.163）,（0.80±1.014）,（0.20±0.561）个;肿瘤细胞凋亡指数分别为4.59%、9.87%和17.4%。对照组肿瘤组织见肿瘤细胞生长活跃:前药治疗组肿瘤组织见有少量细胞空泡变性,少量淋巴细胞浸润,肿瘤细胞生长受到抑制;前药热疗组肿瘤组织可见肿瘤细胞空泡变性,细胞核皱缩,边集甚至消失,仅残留少量肿瘤细胞,并可见散在的成纤维细胞,大量淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润;3组裸鼠正常肝组织、胃、肺、胰腺、小肠、大肠组织均呈正常形态学,无病理性损伤改变。结论1细胞实验黄芪注射液对人结肠癌Lovo细胞的体外增殖具有抑制作用,并能使Lovo细胞阻滞于G₀/G₁期,诱导Lovo细胞凋亡。2动物实验组织特异性CD/5-FC系统热化疗对裸鼠结肠癌肝转移有明显的靶向抑制作用。

全文目录

中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-14
第一部分:黄芪注射液诱导人结肠癌Lovo细胞凋亡机制研究  14-21
  材料与方法  14-16
  结果  16-18
  讨论  18-20
  结论  20-21
第二部分:CD/5-FC系统热化疗对裸鼠结肠癌肝转移的靶向性  21-39
  材料与方法  21-30
  结果  30-35
  讨论  35-38
  结论  38-39
参考文献  39-45
综述结肠癌肝转移基因治疗安全性研究进展  45-51
致谢  51-52
作者简历  52-53
附录硕士在读期间完成和发表的文章  53

5-氟胞嘧啶热化疗对鼠结肠癌肝转移治疗机理研究

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