学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

炎症对肝脏FAT/CD36的表达及脂质积聚的影响

作　者: 殷鹭
导　师: 阮雄中
学　校: 重庆医科大学
专　业: 内科学
关键词: 炎症 软脂酸 FAT/CD36 HepG2细胞 脂质积聚 肝脏
分类号: R575.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 53次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


第一部分炎症因子对HepG2细胞FAT/CD36的表达及脂质积聚的影响目的：包括非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）、胰岛素抵抗等在内的代谢性疾病的发生与慢性炎症有密切的关系。脂肪酸转位酶（fatty acidtranslocase，FAT/CD36）是一种在体内分布十分广泛的膜糖蛋白，并且在脂肪酸的跨膜转运中起着非常重要的作用。但目前对于炎症是否能通过影响组织细胞FAT/CD36的表达从而导致脂肪酸异常转运到细胞内尚不清楚。因此，在体外实验的部分我们使用炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）处理脂肪酸负荷的人肝癌细胞系HepG2细胞，观察炎症对细胞FAT/CD36的表达及脂质积聚的影响以及细胞损伤的情况。方法：首先予浓度分别为0、0.04、0.08、0.16、0.32mmol/L的软脂酸处理HepG2细胞24h，采用Western blot和RT-PCR的方法检测各组HepG2细胞FAT/CD36的蛋白和基因表达水平，用油红O染色观察各组的脂质积聚程度。然后用炎症因子TNF-α（25ng/ml）或IL-6（20ng/ml）单独或联合软脂酸（0.04mmol/L）处理HepG2细胞24h，用Western blot检测各组细胞FAT/CD36的蛋白表达水平，用油红O染色观察细胞内脂滴形成的情况，再分别用酶法和ELISA法测定各组细胞的TG和FFA的含量，然后进一步检测各组细胞的内质网应激相关基因的mRNA的表达水平以及过氧化氢（H2O2）和活性氧（ROS）的含量。结果：（1）软脂酸呈浓度依赖性上调HepG2细胞FAT/CD36的蛋白（r=0.873，P<0.05）和mRNA（r=0.884，P<0.05）的表达水平及细胞内的脂质积聚程度。（2）炎症因子TNF-α和IL-6能明显刺激脂肪酸负荷的HepG2细胞FAT/CD36的蛋白表达进一步增加（P<0.05）。（3）油红O染色显示炎症因子能明显促进脂肪酸负荷的HepG2细胞的脂质积聚程度，胞内TG和FFA定量检测的结果也均与油红O染色的结果一致（P＜0.05）。（4）炎症状态下，HepG2细胞的内质网应激相关基因的表达水平、H2O2和ROS的含量都是明显升高的（P<0.05）。结论：炎症因子可以上调HepG2细胞FAT/CD36的表达、加重细胞内的脂质积聚，并引起细胞的损伤。第二部分炎症对小鼠肝脏组织FAT/CD36的表达及脂质积聚的影响目的：低丰度的慢性系统性炎症反应与脂质在组织细胞内异常的过度沉积及代谢性疾病的发生密切相关。因此，在体内实验的部分我们进一步通过建立C57BL/6J小鼠炎症模型，观察炎症对小鼠肝脏组织FAT/CD36的表达及脂质积聚程度的影响以及肝脏组织的损伤情况。方法：将小鼠分为四个组：普通饮食组（N组）、普通饮食+炎症组（NC组）、高脂饮食组（H组）和高脂饮食+炎症组（HC组）。普通饮食组予普通小鼠饲料，高脂饮食组予西方饲料（60%能量来源于脂肪），炎症组予10%酪蛋白0.5ml隔日皮下注射，非炎症组予生理盐水0.5ml隔日皮下注射作为对照。14周后处死小鼠并收集血清和组织样本，采用ELISA法测定血清中淀粉样蛋白A（SAA）和TNF-α以及游离脂肪酸（FFA）的含量，用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测肝脏组织中TNF-α和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的mRNA表达情况，以观察炎症模型是否成功建立。然后用Western blot和免疫组化的方法观察小鼠肝脏组织中FAT/CD36的蛋白表达情况，用油红O染色的方法观察组织内脂滴形成的情况，再分别用酶法和ELISA法检测组织TG和FFA的含量。然后进一步检测肝脏组织的内质网应激相关基因的mRNA的表达以及H2O2和丙二醛（MDA）的含量。结果：（1）普通饮食或高脂饮食联合酪蛋白注射都可以使小鼠血清中SAA和TNF-α的含量比对照组明显升高（P<0.05）。（2）普通饮食背景下皮下注射10%酪蛋白及高脂饮食喂养均可以使小鼠血清FFA的含量较普通饮食组明显升高（P<0.05）。（3）肝脏组织中，普通饮食或高脂饮食背景下，皮下注射酪蛋白14周都可以使TNF-α的mRNA的表达水平较普通饮食组明显升高（P<0.05），而高脂饮食联合皮下注射酪蛋白可以使MCP-1的mRNA表达水平较普通饮食组显著增加（P<0.05）。（4）普通饮食和高脂饮食的背景下，炎症可以使肝脏组织FAT/CD36的蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。（5）普通饮食和高脂饮食的背景下，炎症可以使肝脏组织的TG的含量明显增加（P＜0.05）；高脂饮食联合炎症处理的情况下，肝脏组织FFA的含量比普通饮食组及高脂饮食组都是升高的（P＜0.05），肝脏组织冰冻切片油红O染色的结果与TG定量检测的结果是一致的。（6）高脂饮食联合炎症处理情况下，肝脏组织的内质网应激相关基因的mRNA的表达和H2O2的含量是比普通饮食组明显增高的；高脂饮食组和高脂饮食联合炎症处理下，肝脏组织MDA的含量比普通饮食组都是明显增加的（P＜0.05）。结论：通过对C57BL/6J小鼠皮下注射10%酪蛋白14周，可以使其体内产生系统性的炎症和局部炎症反应，这表明我们成功的建立了炎症动物模型。普通饮食+炎症组的血清FFA的含量比普通饮食组是升高的，但是在高脂背景下，炎症对血清FFA的增加反而不明显。我们推断，在高脂饮食联合炎症处理的情况下，小鼠体内的脂代谢发生严重紊乱，脂质在肝脏等非脂肪组织异常的过度沉积，从而导致血清FFA反而升高不明显。低丰度的慢性系统性炎症能够通过影响小鼠的肝脏组织FAT/CD36的表达从而加重肝脏组织异常的脂质积聚，从而引起内质网应激以及氧化应激等的发生。

全文目录


英汉缩略语名词对照  5-8
摘要  8-12
ABSTRACT  12-17
前言  17-22
  参考文献  20-22
第一部分：炎症因子对 HepG2 细胞 FAT/CD36 的表达及脂质积聚的影响  22-46
  前言  22
  1 材料和方法  22-34
  2 实验结果  34-43
  3 讨论  43-45
  参考文献  45-46
第二部分：炎症对小鼠肝脏组织 FAT/CD36 的表达及脂质积聚的影响  46-64
  前言  46
  1 材料和方法  46-52
  2 实验结果  52-61
  3 讨论  61-63
  参考文献  63-64
全文总结  64-65
文献综述  65-73
  参考文献  69-73
致谢  73-74
硕士期间发表的学术论文及参加的学术活动  74-75

相似论文

  1. 松萝酸与依托红霉素致肝脏毒性的GC-MS代谢组学研究,R965
  2. 苏钟猪TLR4基因多态性及编码区C1027A功能分析,S828
  3. 蛋内注射leptin对肉鸡肝脏胆固醇代谢相关基因及microRNA表达的影响,S831
  4. p38MAPK抑制剂CBS3830对糖尿病大鼠自体静脉移植内膜增生的影响及机制探讨,R587.1
  5. 肝脏部分缺血/再灌注损伤对小鼠术后认知功能的影响,R614
  6. 维生素A和孟鲁司特对哮喘大鼠气道炎症细胞及Th1/Th2平衡的影响,R725.6
  7. 瘦素对鸡肝脏脱碘酶基因表达与活性的影响,S831
  8. RNAi技术抗呼吸道合胞病毒的实验研究,R725.6
  9. ERK1/2和JNK信号通路对大鼠再生肝8种细胞的增殖和凋亡调控作用研究,Q418
  10. 腑安汤对小鼠术后肠麻痹的作用及肥大细胞相关机制,R285.5
  11. 丹酚酸A调控Nrf2通路对HepG2细胞氧化损伤保护机制的研究,R285.5
  12. 体内特异性阻断白介素17在BALB/c小鼠已建立哮喘模型中作用的研究,R562.25
  13. 肝脏部分切除对肝脏干细胞增殖的影响,R657.3
  14. 脊髓胶质细胞在蜜蜂毒诱致的疼痛与炎症中作用的研究,R741
  15. 氦氖激光治疗炎症性皮损的疗效观察,R751
  16. 偏头痛患者血浆HCY和CRP的含量及其相关性研究,R747.2
  17. 苏州地区儿童呼出气一氧化氮正常值建立及影响因素分析,R446.1
  18. 颈交感神经阻滞对严重创伤患者早期调控治疗的临床研究,R641
  19. 可溶性髓细胞表达触发受体1在肺炎患儿中的表达及临床意义,R725.6
  20. 巨噬细胞炎症蛋白1β（MIP-1β）和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）在类风湿关节炎血清中的检测及意义,R593.22
  21. 低砷饮水暴露对心血管系统的影响及膳食营养因素作用的研究,R151

中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 肝及胆疾病 > 肝代谢障碍
© 2012 www.xueweilunwen.com