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HPSE2基因表达载体的构建及其表达产物的分布研究

作　者: 凃雅琴
导　师: 戴五星
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: HPSE2 EGFP 融合基因基因表达
分类号:
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

研究背景：Urofacial （Ochoa)综合征（UFS）是一种罕见的常染色体隐性遗传病。通过家系连锁分析及染色体外显子测序，HPSE2缺陷被证明是UFS的致病基因，但其机制还不完全清楚，对该基因的功能也多局限于生物信息学预测。目的：利用生物信息学预测，HPSE2为分泌型蛋白可能性大，其N端38个氨基酸为分泌信号肽。本研究以EGFP为表达及鉴定标签，验证HPSE2基因在哺乳动物细胞内是否为分泌表达。方法：利用重组PCR技术，在EGFP基因5′端加入包含有HPSE2分泌信号肽的CDS区(1~588bp)，构建为HPSE2-EGFP-partial融合基因；构建5′端融合IgGκ分泌信号肽的EGFP融合基因IgGκ-EGFP，将两种融合基因克隆到哺乳动物表达载体pcDNA3.1(+)上，构建成pcDNA3.1(+)-HPSE2–EGFP-partial和pcDNA3.1(+)-IgGκ-EGFP表达质粒。以pEGFP-C3作为胞浆表达对照，pcDNA3.1(+)-IgGκ-EGFP作为分泌表达对照，pEGFP-N1-HPSE2为阳性对照，并利用脂质体转染人胚肾Hek293T细胞，通过荧光显微镜及Western检测重组基因表达产物在细胞内外的分布。结果：经酶切、PCR及测序鉴定，重组表达质粒pcDNA3.1(+)-HPSE2-EGFP-partial和pcDNA3.1(+)-IgGκ-EGFP构建成功，经荧光显微镜及Western blot检测，证实HPSE2基因的表达产物分布在细胞内，所以此蛋白并非分泌型蛋白，这与2010年Levy-Adam,F提出的HPSE2是一种分泌型蛋白的结论完全相反。结论：HPSE2蛋白的N端不包含分泌信号肽，其分布于胞浆中，且主要聚集于核周。

全文目录

主要英文缩略词表  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-12
材料与方法  12-34
结果  34-54
讨论  54-56
参考文献  56-57
综述  57-66
  参考文献  64-66
致谢  66-68

HPSE2基因表达载体的构建及其表达产物的分布研究

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