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貉源犬瘟热病毒分离鉴定及其H、F基因序列分析

作　者: 郭抗抗
导　师: 闫喜军
学　校: 江苏科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: CDV 分离鉴定 F基因 H基因
分类号: S858.92
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 3次
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内容摘要


犬瘟热（CD）是由犬瘟热病毒（CDV）引起的一种高度接触性、致死性传染病。我国于1980年从病犬体内首次分离到犬瘟热病毒。目前，随着我国养殖业的快速发展，犬瘟热病已成为危害毛皮经济动物最大的传染病之一。然而近年来，其他科属包括大熊猫、小熊猫、猕猴等多种动物均出现感染犬瘟热病毒的报道，可见犬瘟热病毒的感染呈现不断扩大的趋势，由于该病的高传染性和高致死性，所以对该病的早期预防和早期诊断就显得尤为重要。本研究从哈尔滨一水貂养殖场，采集5只疑似犬瘟热病死貉子的肝、肺、脾、肠等脏器，利用Vero细胞成功分离一株病毒，通过免疫荧光，RT-PCR等方法鉴定为CDV，命名为CDV-HLJ(11)。通过理化特性鉴定分离毒CDV-HLJ(11)对酸、热、乙醚等环境因素敏感，动物回归实验用分离到的CDV-HLJ(11)株第三代细胞毒对貉（狐狸）攻毒显示对貉与狐狸均有明显的致病性。采用RT-PCR方法对分离到病毒的H、F基因进行扩增并测序，并分别与GenBank上已发表的毒株序列进行比对。结果显示，分离株CDV-HLJ（11）的H基因序列与野毒株HeB(07)1、SD(09)3、SD(07)1同源性最高，分别为99.9%、99.7%、99.6%，与疫苗株Strain CDV3、Convac vaccine strain的同源性最低为91.4%。分离株CDV-HLJ（11）的F基因序列与野毒株HeB(07)1、JL(07)1最高，分别为98.9%、99.4%，与疫苗株Onderstepoort、GZ1最低，分别为91.4%、91.1%。进化发育树分析分离毒为野毒株，在基因分型上为Asia-Ⅰ型。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-8
目录  8-10
Contents  10-12
第1章 绪论  12-22
  1.1 CDV 生物学特点  12-14
    1.1.1 病原结构特点  12-13
    1.1.2 核酸组成及特点  13
    1.1.3 CDV 的分离培养  13-14
  1.2 流行病学特点  14
  1.3 CDV 致病机理  14
  1.4 病理变化  14-15
  1.5 犬瘟热诊断  15-18
    1.5.1 病原学方法  15
    1.5.2 免疫学方法  15-16
    1.5.3 单克隆抗体  16-17
    1.5.4 胶体金技术  17-18
    1.5.5 分子生物学方法  18
  1.6 犬瘟热基因工程疫苗研究进展  18-19
    1.6.1 基因疫苗  18-19
    1.6.2 基因工程亚单位疫苗  19
  1.7 CDV 相关蛋白及基因研究进展  19-21
    1.7.1 核衣壳(N)蛋白及其基因  19-20
    1.7.2 融合(F)蛋白及其基因  20
    1.7.3 附着或血凝(H)蛋白及基因  20-21
  1.8 研究目的及意义  21-22
第2章 貉源犬瘟热病毒的分离鉴定  22-32
  2.1 材料  22-23
    2.1.1 病料  22
    2.1.2 实验动物  22
    2.1.3 细胞  22
    2.1.4 主要试剂和仪器  22-23
    2.1.5 常用溶液和试剂的配置及处理  23
  2.2 方法  23-26
    2.2.1 病毒分离  23
    2.2.2 理化特性鉴定  23-24
    2.2.3 RT-PCR 鉴定  24-25
    2.2.4 免疫荧光试验  25
    2.2.5 动物回归试验  25-26
  2.3 结果  26-30
    2.3.1 病毒分离结果  26
    2.3.2 理化特性  26-27
    2.3.3 RT-PCR 检测  27
    2.3.4 免疫荧光检测  27-28
    2.3.5 动物回归实验  28-30
  2.4 讨论  30-32
第3章 H、F 基因的克隆及序列分析  32-55
  3.1 材料  32-33
    3.1.1 主要试剂  32
    3.1.2 试剂的配置  32
    3.1.3 仪器  32-33
    3.1.4 克隆载体和受体菌  33
    3.1.5 病毒毒株  33
  3.2 方法  33-35
    3.2.1 引物设计  33
    3.2.2 病毒基因组 RNA 的提取  33
    3.2.3 RT-PCR  33-34
    3.2.4 凝胶电泳  34
    3.2.5 PCR 产物的回收纯化  34
    3.2.6 目的基因与 T 载体的连接  34-35
    3.2.7 转化  35
    3.2.8 H、F基因序列测定及分析  35
  3.3 结果  35-52
    3.3.1 H 基因 RT-PCR  35-36
    3.3.2 F 基因 RT-PCR  36-37
    3.3.3 H 基因序列分析  37-46
    3.3.4 F 基因序列分析  46-52
  3.4 讨论  52-55
结论  55-56
参考文献  56-61
附录  61-64
攻读硕士学位期间发表论文  64-65
致谢  65

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 野生动物疾病 > 毛皮动物
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