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不同培养代数及葡萄糖、氨基酸对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白基因表达的影响

作　者: 韩亚南
导　师: 侯先志
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白葡萄糖赖氨酸蛋氨酸基因表达
分类号: S823
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

本试验以体外培养的分离于泌乳期荷斯坦奶牛乳腺组织的乳腺上皮细胞(BMECs)为研究对象,研究不同代数对酪蛋白基因表达的影响,在此基础之上,选择原代(P0)和二代(P2)细胞分析赖氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)及葡萄糖(GIc)对BMECs酪蛋白基因表达的影响,同时也进一步验证合适的细胞代数为相关研究试验材料的选择提供理论依据。利用Real-Time PCR检测技术对BMECs P0-P5细胞中αs1-casein, β-casein, κ-casein基因表达进行检测,结果表明：αs1-casein在P0细胞中表达量极显著高于P1-P5(P<0.01),P1-P5之间无显著差异(P>0.05)；β-casein在P0细胞中表达量显著高于P1-P3(P<0.05),极显著高于P4-P5(P<0.01); κ-casein在P0细胞中表达量显著高于P3-P5(P<0.05),与P1,P2细胞无显著差异(P>0.05),初步确定P2或P3BMECs可以应用于泌乳机理等相关研究。2.以体外培养的P0和P2BMECs为模型,研究培养体系中添加Lys、Met、及GIc对酪蛋白基因表达的影响。以不做任何处理的细胞为对照组,添加GIc为处理组Ⅰ、Lys+Met为处理组Ⅱ、Lys+Met+Glc为处理组Ⅲ。通过添加Lys、Met、及Glc对比P0和P2细胞中酪蛋白基因表达。处理时间为24h,每个处理3个重复,通过Real-Time PCR方法检测不同处理对Po和P2细胞中αs1-casein, β-casein, κ-casein基因表达的影响。结果表明：(1)Po和P2细胞3个处理组中酪蛋白基因表达量全部高于对照组。其中P0细胞处理组Ⅲ和处理组Ⅰ中αs1-casein, β-casein基因表达量显著高于(P<0.05)处理组Ⅱ和对照组,处理组Ⅲ高于处理组Ⅰ,差异不显著(P>0.05)；κ-casein在对照组、处理组Ⅱ、处理组Ⅰ、处理组Ⅲ中的表达量依次递增,但差异不显著(P>0.05)；对于P2细胞,β-casein在处理组Ⅲ中表达量高于(P>0.05)处理组Ⅰ,处理组Ⅲ、处理组I表达量显著(P<0.05)高于处理组Ⅱ和对照组,处理组Ⅱ高于对照组但差异并不显著(P>0.05)。αs1-casein, β-casein在对照组,处理组Ⅱ,处理组Ⅰ,处理组Ⅲ中表达量依次递增,但差异不显著(P>0.05)；(2)P0细胞各处理组基因表达量均高于P2细胞,但差异不显著(P>0.05)。综上所述,BMECs培养体系中混合添加Lys、Met、及Glc对BMECs中酪蛋白基因表达量的促进作用高于单独添加组。经Lys、Met、及Glc处理后,P2细胞酪蛋白基因表达量与P0细胞中基因表达量无显著差异,因此,进一步验证P2细胞可以取代P0细胞应用于相关研究。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-7
1 引言  7-19
  1.1 乳腺细胞培养的研究  7-10
    1.1.1 乳腺上皮细胞培养的历史及发展  7-8
    1.1.2 乳腺上皮细胞的应用  8-10
  1.2 乳腺细胞对基础营养物质的摄取及利用  10-15
    1.2.1 乳腺细胞对氨基酸的吸收  10-11
    1.2.2 影响乳腺细胞对氨基酸吸收的因素  11
    1.2.3 乳腺细胞对氨基酸的代谢  11-14
    1.2.4 氨基酸对酪蛋白合成的影响  14-15
  1.3 反刍动物乳腺葡萄糖吸收及利用  15-18
    1.3.1 反刍动物乳腺葡萄糖的吸收、代谢及调控研究进展  15-18
  1.4 本文的研究意义及主要研究内容  18-19
2 研究内容  19-43
  2.1 奶牛乳腺上皮细胞不同代数对酪蛋白基因表达的影响  19-32
    2.1.1 试验材料与方法  20-21
    2.1.2 试验方法  21-24
    2.1.3 统计分析方法  24
    2.1.4 试验结果  24-30
    2.1.5 讨论  30-32
    2.1.6 结论  32
  2.2 赖氨酸、蛋氨酸及葡萄糖对原代和二代BMECs酪蛋白基因表达的影响  32-43
    2.2.1 试验材料与方法  34
    2.2.2 试验设计  34
    2.2.3 试验结果  34-40
    2.2.4 讨论  40-43
    2.2.5 小结  43
3 论文总体讨论  43-44
4 论文结论、创新和展望  44-46
  4.1 结论  44
  4.2 本试验创新之处  44-45
  4.3 待解决问题及展望  45-46
致谢  46-47
参考文献  47-54
作者简介  54

不同培养代数及葡萄糖、氨基酸对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白基因表达的影响

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