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莪术醇对鼻咽癌细胞CNE-2凋亡及NF-κB与Bcl-2表达的影响

作　者: 王娟
导　师: 陈旭
学　校: 桂林医学院
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 莪术醇 鼻咽癌 增殖 凋亡 NF-κB Bcl-2
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:研究体外不同浓度莪术醇(curcumol)诱导鼻咽癌细胞CNE-2凋亡及其对核因子-κB(Nuclearfactor kappa B,NF-κB)与凋亡抑制蛋白Bcl-2表达的影响。探讨莪术醇对鼻咽癌细胞CNE-2凋亡的诱导作用,初步阐明莪术醇的诱导细胞凋亡的机制,为莪术醇抗肿瘤的临床应用提供实验依据。方法:将莪术醇溶于无水乙醇,初始浓度为10mg/mL。按比例浓度配制为12.5、25、50、100μg/mL莪术醇培养基,并以含1%无水乙醇培养基为阴性对照组。采用MTT法检测12.5、25、50、100μg/mL四种不同浓度莪术醇作用CNE-2细胞24、48、72、96、120 h后细胞增殖抑制作用;采用hochest33342荧光染色法观察莪术醇处理CNE-2细胞48 h后细胞凋亡的形态学变化;采用流式细胞术检测莪术醇处理CNE-2细胞48 h后的凋亡率;采用Western Blot检测莪术醇处理CNE-2细胞48h后NF-κB和凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。结果:12.5-100μg/mL莪术醇可以抑制细胞增殖,莪术醇对细胞增殖的抑制作用随莪术醇浓度增加和作用时间延长(12.5μg/mL以外)而逐渐增强,药物作用48、72、96、120 h后,加药组的抑制率与对照组比较,有显著性差异(P<0.05),而12.5μg/mL药物处理组与对照组相比差异无显著性(P>0.05); Hoechst33342染色荧光显微镜下可见经100μg/mL莪术醇作用48h后,普通光学显微镜下形态学表现为细胞体积缩小、细胞脱落、染色质聚集、核固缩、核碎裂等;荧光显微镜下可见凋亡细胞的细胞核呈现致密浓染的强蓝色荧光,并可见凋亡小体而对照组中正常细胞的细胞核则呈现弥散均匀的淡蓝色荧光;流式细胞仪检测发现:CNE-2细胞经不同浓度的莪术醇(12.5,25,50,100μg/mL)及阴性对照组作用48 h后,12.5μg/mL与25μg/mL莪术醇作用CNE-2后细胞凋亡率与对照组的比较,差异无统计学意义(P>0.05),浓度为50ug/mL以上的莪术醇作用CNE-2后细胞后细胞凋亡率与与对照组相比有统计学意义(P<0.01),并且随莪术醇浓度的增加,活细胞数的比例不断减少,凋亡逐渐增加,呈明显的浓度依赖性; Western Blot结果显示: 12.5-100μg/mL莪术醇可以降低CNE-2细胞NF-κB及Bcl-2蛋白的表达,莪术醇处理CNE-2细胞48h后,NF-κB及Bcl- 2蛋白表达的相对含量随莪术醇浓度增加和作用时间延长而逐渐降低,加药组与对照组NF-κB及Bcl- 2蛋白表达的相对含量比较,差异有统计学意义,同时两者之间有相关性(r=0.975,P<0.01)。结论:莪术醇作用CNE-2细胞24、48、72、96、120 h后能明显抑制CNE-2细胞细胞生长,抑制作用呈时间-剂量依赖性;莪术醇作用CNE-2细胞48 h后,在体外可诱导CNE-2细胞凋亡;莪术醇作用CNE-2细胞48 h后,可抑制NF-κB的表达,这可能是莪术醇抑制肿瘤生长诱导细胞凋亡的机制之一;莪术醇作用CNE-2细胞48 h后,可下调Bcl-2蛋白的表达,从而促进其凋亡,并与NF-κB的表达有相关性。

全文目录


中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
英汉缩略词对照表  10-11
前言  11-15
1 材料与方法  15-26
  1.1 实验细胞株  15
  1.2 主要实验试剂  15-16
  1.3 主要实验仪器  16-17
  1.4 实验方法  17-25
  1.5 统计方法  25-26
2 结果  26-34
  2.1 MTT 法结果  26-27
  2.2 形态学观察  27-29
  2.3 流式细胞术检测CNE-2 细胞凋亡  29-31
  2.4 Western Blot 检测NF-κB 和Bcl-2 的蛋白表达  31-34
3 讨论  34-39
  3.1 莪术醇的抗肿瘤作用  34-35
  3.2 莪术醇对NF-κB 蛋白表达的影响  35-36
  3.3 莪术醇对Bcl-2 蛋白表达的影响  36-37
  3.4 莪术醇诱导鼻咽癌凋亡的分子机制  37-39
4 结论  39-40
参考文献  40-47
综述  47-55
  参考文献  51-55
攻读学位期间发表的学术论文目录  55
致谢  55

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