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HMBA和桂皮酸对鼻咽癌细胞CNE2增殖抑制和凋亡的作用及其机制初探

作　者: 左晓娜
导　师: 黄健
学　校: 桂林医学院
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: HMBA 桂皮酸 CNE2 增殖 凋亡
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 27次
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内容摘要


目的：从细胞及分子水平初步探讨诱导分化剂HMBA和桂皮酸对鼻咽癌细胞CNE2增殖抑制和凋亡的作用及其可能机制。方法：应用诱导分化剂HMBA处理鼻咽癌细胞CNE2,倒置相差显微镜观察处理前后鼻咽癌细胞的生长状况和细胞形态；MTT实验及流式细胞术检测细胞生长及细胞周期；Hoechst33258染色、吖啶橙染色观察细胞凋亡：Annexin V-FITC/PI法检测HMBA对CNE2细胞早期凋亡的影响。RT-PCR检测KLF6基因mRNA的表达。免疫细胞化学方法检测桂皮酸处理前后CNE2细胞中KLF6、p53、cyclin D1、c-Jun蛋白表达的变化。结果：HMBA处理后贴壁细胞的数量随药物浓度增加明显减少；MTT实验证实HMBA对鼻咽癌细胞的生长抑制作用呈浓度-时间效应关系,随着诱导剂浓度的增大、作用时间的延长,其抑制效应逐渐增加。处理后鼻咽癌细胞形状由原来的椭圆形或多边形变成不规则形状或多角形；细胞质减少,核浆比例变大。根据IC50,我们选用5mmol/L作为最佳作用浓度进行后续实验。流式细胞术检测结果显示,培养24h时对照组细胞G1期细胞比例为59.5%,S期细胞比例27.5%,而G2期细胞比例为12.9%,HMBA处理24h后,G1期细胞比例为64.9%；S期细胞为28.3%,G2期细胞为6.7%,细胞周期发生明显变化(P<0.05); HMBA作用48h后G1期细胞增加为67.5%,而S期细胞为28.5%,G2期细胞也减少为4.04%,细胞明显被阻滞于G1期(P<0.05)；处理72h后,细胞亦显著被阻滞于G1期(P<0.05),处理96h后,G1期细胞比例为60.2%,而S期细胞比例为32.2%,G2期细胞为7.63%,细胞周期G1期阻滞效应更明显。我们采用三种方法观察细胞凋亡,Hoechst33258染色后可见呈高亮蓝色的凋亡细胞,在部分细胞内可以看到核碎片；吖啶橙染色可以看到凋亡小体的出现。Annexin V-FITC/PI法检测凋亡显示,在HMBA处理12h后即出现凋亡细胞,与对照组相比有统计学意义(p<0.05)。RT-PCR结果显示HMBA处理CNE2细胞后第3天,KLF6mRNA表达水平显著上调(p<0.05)。免疫细胞化学结果显示桂皮酸处理CNE2细胞后KLF6和p53蛋白表达上调(p<0.05),而cyclin D1和c-Jun则表达下调(p<0.05)。结论：诱导分化剂处理后,鼻咽癌细胞CNE2生长明显受到抑制,出现细胞分化形态,细胞周期受阻,诱导细胞凋亡。其作用机理一方面可能是通过上调KLF6基因的表达,上调p53,从而通过p53通路诱导细胞凋亡；另一方面,KLF6可能通过解除c-Jun对p21的抑制作用,下调cyclin D1,抑制Cdk4/6和Cyclin D1复合物活性,将细胞阻滞于G0/G1期,并促进细胞的凋亡。

全文目录


中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
英汉缩略词对照表  9-10
前言  10-14
1 材料与方法  14-24
  1.1 实验材料  14
  1.2 主要实验试剂  14-15
  1.3 主要实验仪器  15-16
  1.4 实验方法  16-23
  1.5 统计学分析  23-24
2 结果  24-40
  2.1 HMBA对CNE2细胞生长的影响  24-25
  2.2 HMBA对CNE2细胞形态的影响  25-27
  2.3 HMBA对CNE2细胞周期的影响  27-32
  2.4 HMBA对CNE2细胞凋亡的影响  32-35
    2.4.1 Hoechst 33258和吖啶橙染色观察细胞凋亡形态  32-34
    2.4.2 Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测CNE2细胞早期凋亡  34-35
  2.5 HMBA处理后KLF6基因mRNA的表达  35-37
  2.6 CINN处理后KLF6、p53、cyclin D1、c-Jun蛋白的表达  37-40
3 讨论  40-44
  3.1 鼻咽癌治疗现状  40
  3.2 诱导分化治疗研究现状  40-41
  3.3 HMBA及桂皮酸在鼻咽癌细胞增殖抑制与凋亡中的作用  41-42
  3.4 HMBA及桂皮酸在鼻咽癌细胞增殖抑制与凋亡中的作用机制  42-44
4 结论  44-45
参考文献  45-51
综述  51-59
  综述参考文献  55-59
攻读学位期间发表的学术论文目录  59

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 耳鼻咽喉肿瘤 > 咽肿瘤
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