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细胞周期蛋白-D1和Ki-67在喉癌组织中的表达及相关性研究

作　者: 张英耀
导　师: 潘新良
学　校: 山东大学
专　业: 耳鼻咽喉科学
关键词: 细胞周期蛋白D1 细胞增殖抗原Ki-67 喉癌表达
分类号: R739.65
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

喉癌是头颈部最常见的恶性肿瘤,在我国该病约占全身肿瘤的1%～5%,其病理类型以鳞状细胞癌为主,占全部喉癌的93%～99%。我国北方地区喉癌的发病率较高,发病年龄50～60岁为最多,男性的发病率高于女性。近年来,随着工业污染的加重,喉癌的发病率有明显的上升趋势。喉癌治疗涉及手术、放射治疗、抗肿瘤药物治疗和基因治疗等综合措施。随着诊断和治疗水平的不断进步,喉癌患者手术后喉功能保留率、生活质量及5年生存率均有了较大的提高,但是晚期喉癌患者的治疗效果仍不尽如人意,局部复发和转移仍为喉癌患者术后5年内死亡的主要原因。作为喉癌早期治疗的微创手术,也要求对喉癌早期诊断和治疗预后有正确的估计,以尽量减少创伤,保留患者的喉功能。因此,作为临床应用基础研究的目的之一,探讨与喉癌发生、发展的相关因素,以期寻找一个有效的检测指标以协助诊断、尽早的区分其病理类型,了解病变的范围以预测肿瘤的预后,有助于确定合理的治疗方案和治疗预期。喉腔黏膜的上皮细胞发生癌变的具体机制不明,可能与吸烟、饮酒、环境污染、病毒感染等因素有关。随着对细胞调控认识的不断深入,研究发现：细胞周期的调控异常是癌症发病的一个重要环节,细胞周期蛋白(Cyclins)作为细胞周期的正向调控因素,控制细胞周期的进程,其表达水平具有细胞周期依赖性,是调节细胞活动的重要蛋白质。Cyclins的异常表达是导致细胞周期调控机制受到破坏的主要因素之一,与恶性肿瘤的发生密切相关。Cyclins在肿瘤的发生发展中所扮演的角色日益成为人们关注的焦点,认为：癌症等恶性肿瘤可能是一类细胞周期性疾病。Ki-67是增殖性细胞核的标记物,代表细胞增殖水平,目前认为：Ki-67的功能与细胞有丝分裂有关。分子生物学研究表明：细胞过度分裂与增殖是肿瘤恶变的重要环节。Ki-67在G1后期出现,S、G2期升高,M期达峰值,只参与增生细胞核反应,于GO期消失,进入G1期时开始表达至有丝分裂后迅速减少,到GO期则不表达。许多研究表明：Ki-67蛋白表达的精确调控、分布,与很多恶性肿瘤的发展、转移、预后,均具相关性,是细胞增殖、完成细胞周期所不可或缺的,是检测肿瘤细胞增殖活性的重要指标,可作为肿瘤预后的经典标记物。Ki-67蛋白临床检测已被广泛开展,但是在喉肿瘤预后及治疗方面的研究应用在近几年才被逐渐报道。本研究通过检测Cyclin-D1和Ki-67在喉鳞状细胞癌组织、癌旁组织、喉腔正常鳞状上皮组织中的表达情况,以期为喉癌的早期诊断和预后判断提供一个可靠的分子生物学指标。目的初步探讨细胞周期蛋白D1和细胞增殖抗原标记物Ki-67在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其与临床、病理特征之间的关系,以及两者在喉鳞状细胞癌组织中表达的相关性,以期为喉癌的早期诊断和预后判断提供一个可靠的分子生物学指标。方法92例我院2000年1月至2005年8月期间收治的喉鳞状细胞癌患者行根治性手术后所留取的标本,其中男性78例,女性14例。年龄36～79岁,平均55.4岁。根据肿瘤原发部位分为：声门上型43例,声门型46例,声门下型3例；根据肿瘤分化程度：高分化(G1)25例；中分化(G2)19例；低分化(G3)48例；根据癌肿的生长范围和扩展的程度,按国际抗癌协会(UICC)2002年第6版公布的TNM分类分期方案如下：Ⅰ期6例；Ⅱ期15例；Ⅲ期46例；Ⅳ期25例。应用免疫组化S-P法检测Cyclin-D1和Ki-67的蛋白表达,以PBS代替一抗作为阴性对照,比较上述基因蛋白在正常喉部鳞状组织(对照1组)、喉鳞状细胞癌组织、喉癌旁组织(对照2组)中的表达情况,探讨Cyclin-D1和Ki-67在喉癌组织中的表达与患者临床分期、病理特征之间的关系以及两者之间的相关性。采用SPSS12.0统计软件进行统计。喉鳞状细胞癌组织、喉腔正常鳞状上皮组织(对照1组)、肿瘤旁组织(对照2组)之间比较,计量资料以(x±s)表示,以one-way ANOVA方法进行总体比较,t检验做组间比较；Cyclin-D1和Ki-67在喉癌组织中的表达与患者临床病理特征之间的关系比较采用四格表资料的χ2检验,Cyclin-D1和Ki-67在喉癌组织中的表达的相关性比较采用Spearman相关分析,检验显著性水准取a=0.05,以P<0.05为差异有统计学意义。结果(1)在92个肿瘤样本中,有60例(65.2%)检测到有细胞周期蛋白D1的表达,而在对照1组和2组中,检出率分别为3%(3/100)和13.1%(12/92),三组对于细胞周期蛋白D1的检出率具有显著性差异(P<0.05),而且进一步分析发现：在不同分期的喉鳞状细胞癌组织中,Cyclin-D1的表达与临床分期之间有统计学相关性(P=0.029<0.05)。然而,Cyclin-D1的表达和其他变量(性别、年龄、癌症的阶段、组织分化、解剖学部位、吸烟史、饮酒史)之间没有统计学相关性。(2)Ki-67免疫组化检测：Ki-67阳性信号主要定位于细胞质,为粗细不等的棕黄或棕褐色颗粒。正常喉部鳞状细胞上皮组织中未见表达,喉癌旁组织中有4例(4.34%)呈弱阳性表达。研究发现：Ki-67的过度表达与肿瘤患者的性别、年龄、解剖学部位、组织分化、吸烟史和饮酒史无统计学相关性。但Ki-67蛋白表达与患者颈部淋巴结转移状态有显著相关关系(P=0.025<0.05)。(3)Ki-67蛋白的表达与患者的生存率无相关性,Ki-67蛋白的表达与生存时间无统计学相关关系(P=0.457)。而Cyclin-D1蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达与患者的生存率有明显的相关关系(P=0.0004<0.05)。(4)在Ki-67阳性高表达的56例喉癌组织中,有41例出现Cyclin D1阳性高表达；在Cyclin Dl阳性低度表达的51例患者中,有36例出现Ki-67阳性低度表达,经Spearman等级相关性检验表明：两者在喉鳞状细胞癌组织中的表达呈显著正相关关系(r=0.620,P<0.001)。结论(1)Cyclin D1在喉鳞状细胞癌组织中表达率高,与患者的临床分期及预后有显著的相关关系,Cyclin D1低表达者有较高的生存率,可作为喉鳞状细胞癌术后的监测指标,为喉鳞状细胞癌的治疗提供一个新的靶点。(2)Ki-67在喉鳞状细胞癌组织中亦有表达,与患者颈部淋巴结转移状态有关,Ki-67高表达与淋巴结转移率高有显著的相关关系,可作为喉鳞状细胞癌患者淋巴结转移的监测指标。(3)Cyclin D1和Ki-67在喉鳞状细胞癌组织中的表达具有显著正相关关系,两者联合检测对喉鳞状细胞癌患者术后辅助治疗及预后判断有一定的指导意义。

全文目录

中文摘要  6-10
英文摘要  10-15
符号说明  15-16
前言  16-20
第一部分材料与方法  20-28
  1.1 标本来源  20
  1.2 临床及病理资料  20-21
  1.3 诊断标准与分期标准  21
  1.4 仪器  21
  1.5 试剂  21-23
  1.6 HE染色  23
  1.7 免疫组化步驟  23-26
  1.8 统计学处理方法  26-28
第二部分结果  28-30
  2.1 CyclinDl. Ki-67在三组组织中的表达  28
  2.2 CyclinDl、Ki-67的表达与喉癌分期等因素旳关系  28-29
  2.3 Cyclin D1与Ki-67相关性分析  29-30
第三部分讨论  30-46
  3.1 Cyclin D1在肿瘤组织中的表达及意义  30-36
  3.2 Ki-67的生物学性质、表达及其与CycHn D1的关系  36-41
  3.3 Ki-67、CycHnDl在喉癌组织中的表达与相关性  41-46
第四部分结论与展望  46-47
附图表  47-52
参考文献  52-64
致谢  64-65
博士期间发表的论文  65-66
附件  66-67
英文论文1 G1/S-specific cyclin-D1 might be a prognostic biomarker for patientswith laryngeal squamous cell carcinoma  67-81
英文论文2 Role of centromere protein Hand Ki-67 in replapse-free survival ofpatients after primary surgery for hypopharyngeal cancer  81-95

细胞周期蛋白-D1和Ki-67在喉癌组织中的表达及相关性研究

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