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RhoB基因表达对结肠癌细胞抑制作用的实验研究

作　者: 宋冬冬
导　师: 王海波
学　校: 青岛大学
专　业: 普外科
关键词: RhoB 结肠癌 HCT116 凋亡增殖
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

实验目的：观察脂质体介导的RhoB转染对人结肠癌细胞HCT116的影响,为结肠癌的临床治疗提供新的思路。实验方法：本实验以人结肠癌细胞HCT116为研究对象。实验共分五组：RhoB蛋白过表达组(pcDNA4-RhoB组)及其阴性对照组(pcDNA4-EGFP组),RhoB蛋白干扰组(pGenesil-1-RhoB组)及其阴性对照组(pGenesil-1-HK组),空白对照组(HCT116组)。将质粒(pcDNA,-RhoB、pcDNA4-EGFP、pGenesil-1-RhoB、pGenesil-1-HK)通过脂质体转染法导入HCT116细胞中,通过荧光显微镜下观察转染效果并计算转染效率；通过Western-Blot免疫印迹法检测各组细胞中RhoB蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡。实验结果：(1)荧光显微镜下观察到绿色荧光,显示脂质体成功将质粒转入结肠癌HCT116细胞中。转染平均效率约为82.4%(2)Western-Blot检测各组细胞中RhoB蛋白的表达,结果显示：pcDNA4-RhoB组RhoB蛋白的表达明显高于其他组,差异具有统计学意义(P<0.05)。pGenesil-1-RhoB组RhoB蛋白表达与HCT116组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)MTT法结果显示：从第二天开始,与pcDNA4-EGFP组哈HCT116组相比,pcDNA4-RhoB组细胞增殖明显受抑制,差别有统计学意义(P<0.05)。(4)细胞凋亡结果显示：pcDNA4-RhoB组、pcDNA4-EGFP组、HCT116组凋亡率分别为17.53±0.71%、5.23±0.42%、4.67±0.55%。pcDNA4-RhoB组明显高于pcDNA4-EGFP组及HCT116组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论：RhoB蛋白过表达可抑制结肠癌细胞HCT116增殖活性,并能促进其凋亡。它可能为结肠癌提供新的治疗思路。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-5
引言  5-7
第一章实验材料  7-12
  1.1 细胞及重组质粒来源  7
  1.2 主要试剂  7-8
  1.3 主要仪器、设备  8-9
  1.4 主要试剂溶液配制  9-12
第二章实验方法  12-20
  2.1 细胞处理  12-13
  2.2 重组质粒转染结肠癌细胞HCT116  13-14
  2.3 各组细胞中总蛋白的提取及蛋白定量  14-15
  2.4 Western-Blot分析  15-17
  2.5 MTT实验  17-18
  2.6 凋亡检测  18-20
第三章实验结果  20-31
  3.1 细胞复苏及培养  20
  3.2 重组质粒转染结肠癌细胞HCT116  20-21
  3.3 Western-Blot检测各组细胞中RhoB蛋白表达情况  21-23
  3.4 MTT方法检测各组细胞增殖  23-29
  3.5 流式细胞仪检测各组细胞凋亡率  29-31
第四章讨论  31-33
结论  33-34
参考文献  34-36
综述  36-44
  综述的参考文献  40-44
攻读学位期间的研究成果  44-45
致谢  45-46

RhoB基因表达对结肠癌细胞抑制作用的实验研究

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