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靶向Survivin通路的肿瘤基因治疗

作　者: 李兵华
导　师: 刘新垣
学　校: 中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: survivin 人端粒酶逆转录酶启动子 RU486调控系统显性抑制突变体 RNA干扰溶瘤腺病毒非凋亡性细胞死亡
分类号: R730.5
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

细胞凋亡在很多生命活动中发挥着重要作用。细胞凋亡紊乱往往是肿瘤发生的一个重要因素,因此细胞凋亡的研究为认识和治疗癌症提供了重要依据。Survivin是IAP家族中的一个特殊成员,它特异性地在肿瘤细胞中高表达,具有抑制细胞凋亡和调控细胞周期的功能。研究表明抑制内源survivin表达能够诱导细胞凋亡,这为肿瘤治疗提供了一种新途径。肿瘤基因治疗的一个主要目的就是开发出有效的基因载体,使得治疗基因能够受到严格调控并在特定组织表达。Mifepristone/RU486调控系统具有很低的本底转录活性和很高的可诱导性,因此得到广泛应用。本文的第一章优化了这个调控系统,用人端粒酶逆转录酶启动子来控制反式调控子的表达。我们用这个系统在人结肠癌细胞中诱导表达Survivin的显性抑制突变体(surDN)。结果显示RU486可特异性的诱导surDN在肿瘤细胞中表达并引发caspase依赖的凋亡和抑制肿瘤细胞生长,并与化疗药物具有联合抑癌效应。裸鼠肿瘤模型进一步证明了这个系统在肿瘤基因治疗中的潜力。结果显示诱导表达surDN能有效抑制肿瘤生长,提高荷瘤裸鼠的存活率。RU486与化疗药物cisplatin联用能彻底抑制肿瘤的生长。RNA干扰是抑制基因表达的有力工具,具有特异性强和效率高等特点;而腺病毒载体具有转染效率高和表达外源基因持续时间长等优点。本文的第二章将二者结合起来,构建了表达靶向survivin siRNA的腺病毒载体。结果显示,该腺病毒载体能够抑制肝癌细胞内survivin的表达,诱导肝癌细胞发生凋亡和抑制肝癌细胞生长。溶瘤腺病毒能够有选择性的在肿瘤细胞中复制并杀死肿瘤细胞。本文的第三章证明了survivin启动子是一个肿瘤特异性启动子并用它构建了一种溶瘤腺病毒Ad.SP/E1A。Ad.SP/E1A能特异性的在肿瘤细胞中表达E1A并引发细胞毒性。在荷瘤动物实验中,瘤内注射Ad.SP/E1A病毒能显著抑制肿瘤生长。进一步研究发现Ad.SP/E1A引起的细胞死亡是不通过凋亡途径的。因此Ad.SP/E1A是一种有效的肿瘤治疗试剂。总之,survivin是肿瘤治疗的理想靶位点,本文探索了通过靶向survivin通路来治疗肿瘤的几种新方法,显示出了良好的治疗效果,也为肿瘤基因治疗提供了新的思路和理想平台。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-8
引言  8-11
第一章诱导表达survivin 显性抑制突变体能抑制结肠癌生长  11-36
  前言  11-15
  1.1 材料与方法  15-21
  1.2 结果  21-33
  1.3 讨论  33-36
第二章携带靶向survivin 的siRNA 腺病毒的构建  36-50
  前言  36-39
  2.1 材料与方法  39-42
  2.2 结果  42-49
  2.3 讨论  49-50
第三章用survivin 启动子构建溶瘤腺病毒  50-77
  前言  50-52
  3.1 材料与方法  52-58
  3.2 结果  58-74
  3.3 讨论  74-77
参考文献  77-84
在学期间发表论文及申请专利  84-86
致谢  86

靶向Survivin通路的肿瘤基因治疗

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