学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

携带mda-7/IL-24和Plasminogen kringle 5双靶向复制型溶瘤腺病毒的制备和体外抑瘤及安全性研究

作　者: 张金合
导　师: 戴平；刘新垣
学　校: 华东师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 肿瘤特异性增殖腺病毒 端粒酶逆转录酶启动子 E1A基因 E1B 55kDa基因 基因病毒治疗 K5 mda-7/IL-24
分类号: R73-3
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 104次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


肿瘤特异性增殖腺病毒是一类充满希望的抗肿瘤药物，这些病毒能特异性地在肿瘤细胞中复制、增殖，从而杀死肿瘤细胞，而对正常细胞毒性较小。构建肿瘤特异性增殖腺病毒主要有两种方法：一是利用肿瘤特异性启动子控制病毒复制必需的基因，如控制腺病毒的E1A基因等。本实验室用hTERT启动子取代野生型腺病毒E1A基因自身的启动子，构建了一个新的肿瘤特异性增殖腺病毒Ad．TERT。另一种方法是将病毒在正常细胞中复制所必需、而在肿瘤细胞中复制不需要的基因删除。本实验室将腺病毒E1B 55kDa蛋白基因剔除后构建了另外一类肿瘤特异性增殖腺病毒ZD55-Gene。这两种构建的肿瘤特异性腺病毒都表现了很好的肿瘤抑制效应。 为进一步提高肿瘤特异性增殖病毒的抗癌效果，本实验室提出了一种肿瘤治疗的新策略：在肿瘤特异性增殖病毒中加入抗癌基因，将肿瘤的基因治疗与病毒治疗结合起来，称之为肿瘤的基因病毒治疗。肿瘤的基因病毒治疗保留了病毒杀死癌细胞的能力，同时随着病毒在肿瘤细胞中复制，也大大增加了抗癌基因在肿瘤细胞中的表达量。这对实现更安全有效的肿瘤治疗具有十分重要的意义，本工作构建成了靶向hTERT阳性的和p53蛋白功能缺失的肿瘤特异性增殖腺病毒TD55，即将腺病毒的E1A基因的启动子用hTERT启动子代替，同时删除了E1B 55kDa蛋白基因。 肿瘤的血管生成在肿瘤发展过程中起到非常重要的作用，如肿瘤的生长、转移等关键步骤都依赖肿瘤新生血管来提供营养。本工作将抑制血管生成的人纤溶酶原K5和mda-7／IL-24插入到TD55上，构建成了重组腺病毒TD55-K5、TD55-IL-24和TD55-IL-24-K5。插入的K5可抑制肿瘤血管生成，而IL-24则能在抑制新生血管生成的同时还可专一性地促进肿瘤细胞凋亡，再加上靶向性溶瘤腺病毒的溶瘤效应，从理论上讲，TD55-gene系统靶向基因-病毒治疗的效果会优于单纯的基因治疗，也会优于单纯的病毒治疗，可为肿瘤的靶向基因-病毒治疗提供一个理想的平台。细胞实验初步证明了该重组腺病毒具有较高的安全性和较高的杀伤肿瘤细胞的活性，如在正常细胞HMCS中TD55要比Onyx015好1.5倍，重组腺病毒TD55-IL-24杀伤肿瘤细胞Bcap37的能力要比Onyx015强接近100倍。

全文目录


缩略词表  11-12
第一部分 双基因双靶向溶瘤腺病毒的制备  12-69
  前言  12-13
  材料  13-19
  方法  19-52
    一、pTD55-IL-24和pTD55-K5构建  19-26
    二、pTD55-K5-IL-24的构建  26-33
    三、pTD55-EGFP的构建  33-39
    四、同源重组法构建重组腺病毒  39
    五、抽提病毒DNA及鉴定  39-40
    六、病毒的空斑纯化、大量制备与滴度测定  40-42
    七、蛋白质印迹(Western Blot)  42-44
    八、RT-PCR  44-45
    九、293细胞的培养  45-52
  结果  52-60
    一、重组质粒的鉴定  52-56
    二、重组腺病毒鉴定  56-58
    三、携带治疗基因mRNA表达水平的鉴定  58-59
    四、重组腺病毒的western blot鉴定：  59-60
  讨论  60-69
第二部分 双基因双靶向增殖腺病毒治疗肿瘤的体外实验研究  69-102
  材料  69-70
  方法  70-75
    一、主要溶液的配置  70-72
    二、细胞培养  72
    三、蛋白质印迹分析(Western Blot)  72
    四、病毒增殖试验(virus progeny assay)  72-73
    五、细胞活力检测(cell viability assay)  73
    六、CPE实验  73
    七、DNA片断化实验  73-74
    八、Hoechst33258凋亡细胞染色  74
    九、肿瘤血管形成实验(tube formation assay)  74-75
    十、荧光显微镜镜检观察病毒增殖情况  75
  结果  75-86
    一、病毒增殖试验  75-76
    二、CPE实验(Cytopathic Effect：细胞病理效应)  76-78
    三、细胞活力检测  78-80
    四、Hoechst33258凋亡细胞染色  80-81
    五、肿瘤血管形成实验  81-83
    六、DNA片断化  83-84
    七、荧光显微镜镜检观察病毒增值情况  84-85
    八、Western blot分析Caspase3的活化  85-86
  讨论  86-90
  参考文献  90-102
第三部分 综述溶瘤腺病毒的靶向性策略  102-107
  1 腺病毒的性质  102
  2 腺病毒的靶向性策略基础  102-105
  3 腺病毒双靶向或多靶向策略  105
  4 展望  105
  参考文献  105-107
附录  107-113
发表文章目录  113-114
致谢  114

相似论文

  1. 删除E1B的靶向溶瘤腺病毒携带IL-24基因治疗肝癌的研究,R735.7
  2. E1A基因阻遏子基因抑制TNF-α诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的作用与机制研究,R542.22
  3. 一、肝癌抑制基因-1转运功能区的研究二、构建cea-sVISA-dkk1质粒在结肠癌个性化治疗上的探索,R735.7
  4. 通过急性髓性白血病干细胞表面CD123导入溶瘤腺病毒的研究,R733.71
  5. hTERT启动子调节HSV-TK和IL-12融合基因肿瘤细胞特异性表达载体的构建及其表达鉴定,R450
  6. 人胃癌细胞系端粒酶逆转录酶基因启动子区域甲基化的检测,R735.2
  7. hTERT启动子调控腺病毒介导的HSV-TK/GCV基因系统治疗膀胱癌的实验研究,R737.14
  8. 用可调控靶向无肠腺病毒载体携带抗癌基因治疗恶性肿瘤的研究,R73-36
  9. 人端粒酶逆转录酶启动子驱动重组腺病毒治疗人前列腺癌的动物实验研究,R737.25
  10. 一种新型的双靶向融瘤腺病毒对肿瘤的基因—病毒治疗,R730.5
  11. E1A基因对人肺腺癌细胞增殖和转移的影响,R734.2
  12. 人源基因载体phrn介导p53基因在Bel-7402中的抗癌研究,Q789
  13. 携带IL-18的复制型溶瘤腺病毒治疗肝癌的研究,R735.7
  14. E1A基因对人宫颈癌细胞体外放射增敏的实验研究,R737.33
  15. MDA-7基因的腺病毒载体构建及其肿瘤靶向治疗的实验研究,R730.5
  16. 携带mIFN-γ基因的溶瘤病毒治疗消化系恶性肿瘤的实验研究,R735
  17. 新型嵌合启动子在肿瘤治疗中的应用,R73-36
  18. 携带mda-7/IL24的嵌合型溶瘤腺病毒对wnt信号异常肿瘤的靶向基因—病毒治疗,R730.5
  19. 新型溶癌腺病毒抗白血病细胞作用及其机制的实验研究,R733.7
  20. hTERT启动子调控hNIS和hTPO基因联合转染胶质瘤细胞介导放射性碘治疗的研究,R739.4

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 肿瘤学实验研究
© 2012 www.xueweilunwen.com