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RU486系统调控的IL-2基因的表达

作　者: 苗兰芳
导　师: 王琳
学　校: 吉林大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 白细胞介素-2 RU486调控系统裸DNA 水流动力学注射
分类号: R450
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

在基因治疗中,不受限制的基因表达是非生理性的,不仅干扰细胞内的信号系统,甚至对机体有害。理想的基因治疗是转基因能够在需要时表达,而且表达水平和持续时间可以被调控。本实验采用水流动力学注射法,将含有RU486调控系统和肝脏特异性启动子的小鼠白细胞介素-2(murine interleukin-2,mIL-2)基因表达质粒pRS-IL-2注射到小鼠体内,在不同时间点取血及主要器官,通过ELISA、PCR及RT-PCR等方法,分析质粒在主要器官内的分布及可诱导性表达,探讨不同质粒剂量及不同诱导方式对转基因mIL-2表达的影响。结果显示,通过水流动力学注射法将质粒pRS-IL-2注入小鼠体内,7d后用RU486进行诱导,无论质粒剂量是多少,诱导前血清中均检测不到mIL-2,诱导后mIL-2表达水平均在诱导后4h最高,10h则迅速下降至基线值,而1d、3d、6d均未检测到mIL-2的表达。当质粒剂量为10μg时,诱导效率最高,为诱导前的478.6倍。mIL-2不仅呈质粒和RU486剂量依赖性表达,而且表达与诱导方式有关,当2天1次腹腔注射RU486时,mIL-2基因表达呈波浪状,1天1次注射则可以获得持续线性表达。注射5μg质粒后,至少在28d内可以重复诱导mIL-2基因表达4次,而且mIL-2仅在肝组织中表达。综上所述,使用含有RU486调控系统和肝脏特异性启动子的mIL-2表达质粒pRS-IL-2,可以实现对mIL-2基因表达的时间及空间调控。

全文目录

内容提要  4-7
第1章综述  7-12
  1.1 白细胞介素-2（INTERLEUKIN-2，IL-2）  7-9
    1.1.1 IL-2 的生物学特性及其抗肿瘤机制  7-8
    1.1.2 IL-2 在肿瘤治疗中的应用  8-9
  1.2 RU486 调控系统  9-11
    1.2.1 RU486 调控系统的基本结构  9-10
    1.2.2 RU486 调控系统的作用机制  10
    1.2.3 RU486 调控系统的特点  10-11
    1.2.4 RU486 调控系统的应用  11
  1.3 问题与展望  11-12
第2章材料与方法  12-18
  2.1 主要仪器及试剂  12-13
  2.2 质粒构建  13-14
  2.3 质粒大量提取及酶切鉴定  14
  2.4 细胞培养  14
  2.5 质粒转染  14
  2.6 质粒DNA 注射  14
  2.7 χ-gal 染色  14-15
  2.8 mIL-2 检测  15
  2.9 PCR 及RT-PCR 分析  15-17
    2.9.1 组织总RNA 的提取  15-16
    2.9.2 组织DNA 的提取  16
    2.9.3 逆转录反应（RT）  16
    2.9.4 聚合酶链式反应（PCR）  16-17
  2.10 肝脏形态学分析  17
  2.11 统计学处理  17-18
第3章结果  18-26
  3.1 质粒鉴定  18
  3.2 LacZ 基因的细胞与组织特异性及 RU486 依赖性表达  18-20
  3.3 体外 mIL-2 的 RU486 剂量依赖性表达  20
  3.4 体内 mIL-2 的动力学表达  20-21
  3.5 体内 mIL-2 的质粒及 RU486 剂量依赖性表达  21-22
  3.6 不同诱导方式下 mIL-2 的表达  22-23
  3.7 PCR 及RT-PCR 分析  23-25
  3.8 肝脏形态学改变  25-26
第4章讨论  26-30
  4.1 水流动力学注射法的有效性及安全性  26-27
  4.2 RU486 系统的可调控性  27-28
  4.3 RU486 系统可在空间上调控转基因 mIL-2 的表达  28
  4.4 RU486 系统可在时间上调控转基因 mIL-2 的表达  28-29
  4.5 RU486 系统可调控转基因 mIL-2 的表达水平及持续时间  29-30
第5章结论  30-31
参考文献  31-35
致谢  35-36
中文摘要  36-39
ABSTRACT  39-42

RU486系统调控的IL-2基因的表达

内容摘要

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