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马传贫病毒驴白细胞毒弱毒基质蛋白单克隆抗体的制备及其表位的初步鉴定

作　者: 于在江
导　师: 马学恩；周建华
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 马传染性贫血病毒基质蛋白单克隆抗体表位鉴定
分类号: S852.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 64次
引　用: 1次
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内容摘要

本研究用纯化的重组EIAV弱毒株基质蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,通过间接ELISA|、IFA筛选和Western-Blot鉴定,采用有限稀释法,经过3次克隆筛选,获得7株稳定分泌抗EIAV弱毒株基质蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为:1F12、1E2、1E3、4B10、4H7、5E5、4G5。利用所研制的抗EIAV-P15蛋白McAb进行间接免疫荧光法对病原检测具有很高的特异性。经Western-blot分析,7株单抗均能与EIAV弱毒株基质蛋白发生特异性反应。将EIAV-CA基因分为4个重叠基因片段分别在大肠杆菌中表达,用EIAV感染马阳性血清对融合表达的蛋白进行了Western-Blot分析,结果显示,4个基因片段能够表达,将4个表达的蛋白分别命名为:Peptide1、Peptide2、Peptide3、Peptide4,然后,分别用所表达的蛋白和用所获得的单抗分别进行Western-Blot分析,对所获得的单抗进行表位的初步鉴定,结果表明,单抗1E3识别Peptide1;4H7识别Peptide2;4G5识别Peptide3。其它4株单抗不与分段表达的肽段反应,可能是构象依赖性表位。总之本研究在我国弱毒株病毒分子生物学特性的基础上,利用重组的MA蛋白制备了一系列单抗,用分段表达基因片段的方法对其表位进行了初步的鉴定,对深入了解EIAV弱毒株基质蛋白抗原分子特性,成功为准确快速的病原诊断与鉴别诊断奠定了物质基础。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-7
1 引言  7-17
  1.1 马传染性贫血病毒概述  7-8
  1.2 EIAV 结构基因及其编码蛋白  8-12
  1.3 调节蛋白及其编码区  12-15
  1.4 本研究课题的目的与意义  15-17
2 实验一马传染性贫血病毒基质蛋白单克隆抗体的制备  17-31
  2.1 试验材料  17-18
  2.2 试验方法  18-19
  2.3 杂交瘤细胞株的建立  19-21
  2.4 单克隆抗体的筛选与鉴定  21-23
  2.5 杂交瘤细胞的冻存和复苏  23
  2.6 体内接种杂交瘤细胞，制备腹水  23
  2.7 单克隆抗体的纯化  23
  2.8 结果  23-29
  2.9 讨论  29-31
3 实验二 EIAV 基质蛋白单克隆抗体抗原表位的初步鉴定  31-39
  3.1 试验材料  31
  3.2 试验方法  31-35
  3.3 试验结果  35-39
4 结论  39-41
致谢  41-42
参考文献  42-49
作者简介  49

马传贫病毒驴白细胞毒弱毒基质蛋白单克隆抗体的制备及其表位的初步鉴定

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