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Fucoidan对小鼠肝癌Hca-F细胞生物学行为的影响及免疫调节作用研究

作　者: 刘宪丽
导　师: 邹向阳
学　校: 大连医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 褐藻多糖硫酸酯转移免疫调节金属基质蛋白酶
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 3次
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内容摘要

目的:海洋褐藻中的褐藻多糖硫酸酯具有抗凝血、抗炎症、抗肿瘤等多重生物活性,其潜在生物功效日益受到人们的高度重视,也成为近年海洋药物研究的热点之一。本实验将进一步探讨褐藻多糖硫酸酯对小鼠肝癌细胞生长和转移行为的影响及对正常小鼠免疫细胞的影响,并探讨其抗肿瘤作用的机理。方法:1.采用乙醇重沉淀法进一步提纯褐藻多糖硫酸酯;采用硫酸-苯酚法检测所提样品中的糖含量,采用Dodgson法测定硫酸基含量。2.采用MTT法检测褐藻多糖硫酸酯对Hca-F肝癌细胞体外生长的影响;淋巴结体外粘附实验、穿膜实验、侵袭实验检测褐藻多糖硫酸酯对小鼠肝癌细胞粘附、迁移行为的影响。3.采用明胶酶谱、ELISA等方法检测褐藻多糖硫酸酯对肝癌细胞转移相关蛋白表达水平的影响,RT-PCR的方法检测褐藻多糖硫酸酯对转移相关蛋白mRNA表达水平的影响。4.采用MTT法检测褐藻多糖硫酸酯对正常小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;巨噬细胞吞噬中性红实验检测褐藻多糖硫酸酯对脾巨噬细胞吞噬活性的影响;ELISA法检测褐藻多糖硫酸酯对脾细胞细胞因子分泌水平的影响。结果: 1.得到褐藻多糖硫酸酯,测得其总糖含量为42%,硫酸基含量为12%。2.褐藻多糖硫酸酯对Hca-F肝癌细胞体外生长有抑制作用,但抑制作用不明显,褐藻多糖硫酸酯对肝癌细胞的粘附、迁移能力有明显的抑制作用。3.ELISA、明胶酶谱、Western blot、RT-PCR结果显示,褐藻多糖硫酸酯可以下调基质金属蛋白酶MMP-2的蛋白和mRNA的表达。4.褐藻多糖硫酸酯对脾淋巴细胞增殖、Mφ吞噬活性及细胞因子IL-6、IL-10、IL-12、IL-18和TNF-α的分泌均有均有促进作用。结论:褐藻多糖硫酸酯具有抗肿瘤和免疫调节的的活性。其抗肿瘤机理可能即通过提高机体细胞与分子免疫应答水平,调节细胞因子分泌;又可通过直接作用于肿瘤细胞,下调基质金属蛋白酶MMP-2的表达,抑制肿瘤转移实现的。

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一、摘要 7-10 （一）中文摘要 7-8 （二）英文摘要 8-10二、正文 10-35 前言 10-11 第一部分 11-15 （1）实验材料 11-12 （2）实验方法 12-13 （3）实验结果 13-14 （4）讨论 14-15 第二部分 15-27 （1）实验材料 15-16 （2）实验方法 16-20 （3）实验结果 20-25 （4）讨论 25-27 第三部分 27-32 （1）实验材料 27-28 （2）实验方法 28-29 （3）实验结果 29-31 （4）讨论 31-32 参考文献 32-34 结论 34-35三、综述 35-43 （一）正文 35-40 （二）参考文献 40-43四、附录 43-44五、致谢 44

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