学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究

作 者: 周莹
导 师: 张学光
学 校: 苏州大学
专 业: 免疫学
关键词: 协同刺激分子 PD-L1 单克隆抗体 T细胞 可溶性PD-L1 肺癌
分类号: R392
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 18次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
 

内容摘要


Bretscher和Cohn在T细胞活化双信号模型的基础上提出“协同刺激信号”[1],如果缺少协同刺激分子提供的第二信号,将会导致T细胞的无反应性或特异性免疫耐受甚至凋亡。正性和负性协同刺激信号的调节及两者之间的平衡在机体免疫应答的整个过程中发挥着重要的调节作用[2-3]。PD-1/PD-L1是一对重要的负性协同刺激分子。人PD-L1基因定位在染色体9p24.2 ,编码290个氨基酸残基的I型跨膜蛋白[4,7,9]。PD-1/PD-L信号对淋巴细胞的增殖发挥负性调控功能,可防止过度的免疫损伤及自身免疫性疾病的发生,有利于维持机体的免疫自稳[6-7]。PD-L1组成性表达于单核/巨噬细胞以及树突状细胞(DC),并在活化后呈上调表达。同时,大量研究结果证实多种肿瘤细胞的胞膜和胞浆都有PD-L1的表达[8-9]。肿瘤细胞表面的PD-Ll在肿瘤细胞诱导特异性CTL凋亡的过程中发挥重要作用[9]。PD-1/PD-L1途径与肿瘤细胞免疫逃逸密切相关,阻断此途径可增强机体的抗肿瘤免疫应答[10-12]。因此,PD-L1分子成为近年来免疫学研究的热点,有望成为肿瘤、自身免疫性疾病和病毒感染性疾病的免疫干预治疗的有效靶分子。本课题研究以高表达人PD-L1分子的基因转染细胞L929/PD-L1作为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以L929/PD-L1作为抗体筛选细胞,L929/mock为对照细胞,经间接免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选和多次克隆化培养,筛选出分泌特异性鼠抗人PD-L1单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为11G8 mAb,2G5 mAb和5C3 mAb,Western-blotting分析显示,3株抗体都可以特异性识别L929/PD-L1细胞上蛋白质,而不能识别L929/mock。抗原位点竞争抑制实验提示3株单抗与商品化的anti-PD-L1-PE mAb识别细胞抗原结合位点不同。对3株抗体生物学功能的研究结果提示,3株抗体均能够识别活化T细胞表达的PD-L1分子,且在体外能够显著促进T细胞的增殖,是具有较好效应的功能性单克隆抗体。利用自主研制的sPD-L1 ELISA检测系统测定了健康人外周血、肺癌患者外周血及胸水血清中可溶性PD-L1的表达水平。结果显示,肺癌患者外周血中sPD-L1表达水平明显高于健康志愿者;肺癌患者胸水中sPD-L1的表达水平高于肺癌患者外周血;肺癌患者外周血中sPD-L1的表达与年龄、性别及肺癌III、IV期无明显相关性;腺癌患者、鳞癌患者外周血中sPD-L1表达水平明显高于小细胞癌患者。sPD-L1在肺癌患者外周血中异常高表达表明该因子进一步抑制了机体的免疫功能,使抗原特异性PD-1+ T细胞失能。因此,异常表达的sPD-L1参与了PD-1/PD-L1抑制途径的调节,增加了肿瘤细胞免疫逃逸的复杂性和多面性。综上所述,本课题成功研制出3株特异性鼠抗人PD-L1功能型单克隆抗体,且这3株单抗可用于FACS、Western blot和ELISA检测等,这3株单抗具有促进T细胞增殖的功能;对健康人外周血、肺癌患者外周血及胸水血清中可溶性PD-L1的表达水平检测显示,sPD-L1在肺癌患者外周血中异常高表达。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-9
研究背景  9-22
  一、PD-L1 及其受体的生物学特征  9-10
  二、PD-L1 信号对体外 T、B 细胞功能的影响及其机制  10-12
   三、PD-L1 信号的负性调控模式  12-15
  四、可溶性分子参与的免疫应答调节具有重要的生物学意义  15-16
  参考文献  16-22
第一部分 鼠抗人PD-L1 功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究  22-36
   材料与方法  22-29
  结果  29-32
  讨论  32-34
  参考文献  34-36
第二部分 人可溶性PD-L1 分子在肺癌患者血清中的表达特性  36-46
   材料与方法  37-39
  结果  39-42
  讨论  42-43
  参考文献  43-46
小结与展望  46-47
综述  47-57
  参考文献  53-57
硕士学习期间发表的论文  57-58
本课题的受资助情况  58-59
缩写词表  59-61
致谢  61-62

相似论文

  1. 苹果多酚对UVB诱导HepG2细胞损伤的防护与修复研究,S661.1
  2. 心肌细胞电生理仿真计算引擎自动生成的研究与实现,R319
  3. 基于细胞电生理模型的膜片钳实验仿真平台设计与实现,R318.0
  4. 数字电路内建自测试方法的研究,TN79
  5. 冬凌草甲素调控周期相关蛋白抑制SGC-7901细胞增殖作用的研究,R285
  6. 不同时间血液灌流对脓毒症兔促炎细胞因子及生存时间影响,R459.7
  7. 小鼠磨牙中同时过表达sFrp2和sFrp3对磨牙发育的影响,Q954.48
  8. hBMP4和hBMP7在中国仓鼠卵巢细胞中的表达研究,Q78
  9. 抗吡虫啉—甲基对硫磷双特异性单克隆抗体的研究,S482.2
  10. 稻瘟病菌转录因子Moswi6的功能研究,S435.111.4
  11. 草鱼呼肠孤病毒vp5、vp7基因cDNA的克隆、表达及VP5、VP7蛋白亚细胞定位研究,S941.41
  12. 猪前脂肪细胞分化过程中抵抗素基因表达水平及其影响因素,R587.1
  13. Pin1在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞周期的影响,R738.1
  14. 脐血间充质干细胞移植治疗帕金森大鼠的实验研究,R742.5
  15. 基于电穿孔技术的活细胞表面增强拉曼光谱研究,R318.51
  16. 西施舌精子冷冻保存及其冷冻损伤机理研究,S968.3
  17. CADPE抗肿瘤作用及对胃癌细胞凋亡的影响,R735.2
  18. 沙利度胺衍生物的设计合成及抗肿瘤活性研究,R965
  19. 塞来昔布与β-榄香烯联合给药的抗肿瘤作用及其机制研究,R96
  20. 鬼臼毒素衍生物的设计、合成及抗肿瘤活性研究,R284
  21. 甲型流感病毒M2蛋白的表达、纯化及其免疫原性的研究,R392

中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
© 2012 www.xueweilunwen.com