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日本血吸虫重组蛋白rSjGST的表达纯化及单克隆抗体的制备和特性鉴定

作　者: 刘文
导　师: 宋礼华；徐振山
学　校: 安徽医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 日本血吸虫 SjGST蛋白 蛋白纯化 亲和层析 单克隆抗体
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的获取高纯度的日本血吸虫重组GST蛋白( rSjGST) ,并制备出该蛋白的单克隆抗体,并对其相关的生物学特性进行鉴定,建立日本血吸虫病患者GST蛋白水平检测方法。方法将含有重组质粒pET28a-SjGST的工程菌BL21进行培养并进行IPTG诱导表达后,破碎大肠杆菌菌体并利用His-tag亲和层析和高效液相色谱(HPLC)纯化出rSjGST蛋白,纯化出的目的蛋白使用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)以及免疫印迹技术进行鉴定。之后采用B淋巴细胞杂交瘤技术,以高纯度的rSjGST蛋白免疫Balb/c雌性小鼠,常规聚乙二醇介导融合,以间接ELISA方法筛选阳性克隆,有限稀释法亚克隆筛选单克隆细胞株,并使用秋水仙素对其核型进行鉴定,使用ISO-2鼠源单克隆抗体亚型检测试剂盒检测其亚类,并检测其效价、特异性等。建立以双抗夹心法和间接ELISA法检测血清GST水平的方法,并探讨该方法的精密度、准确性和特异性等。结果纯化出大量的高纯度rSjGST蛋白,并且筛选出能够稳定分泌抗rSjGST单抗的杂交瘤细胞株1B11和3C12。用试剂盒检测出此单抗的亚型为IgG2b和IgG1。结论依靠大肠杆菌表达系统,本实验高效表达出了rSjGST蛋白,并以此rSjGST蛋白制备出了单克隆抗体1B11和3C12,所建立的双抗体夹心ELISA检测血清rSjGST蛋白水平的方法为今后的血吸虫病免疫诊断提供了研究基础,这项诊断技术同样可以应用于临床日本血吸虫病的血清检测。

全文目录


缩略词表  6-7摘要  7-8Abstract  8-10[第一部分] 日本血吸虫重组蛋白SjGST的表达纯化、 条件优化及鉴定  10-27  1. 前言  10-13  2. 材料与方法  13-21  3. 结果  21-24  4. 讨论  24-27[第二部分] 日本血吸虫重组 rSjGST 蛋白的单克隆抗体制备  27-42  1. 前言  27-28  2. 材料与方法  28-39  3. 结果  39-40  4. 讨论  40-42[第三部分] 日本血吸虫 rSjGST 蛋白单克隆抗体的特性鉴定  42-57  1. 前言  42-43  2. 材料与方法  43-48  3. 结果  48-51  4. 结论  51-52  5. 讨论  52-57[第四部分] rSjGST 蛋白和抗 rSjGST 单克隆抗体检测日本血吸虫病  57-64  1. 前言  57-58  2. 材料与方法  58-61  3. 结果  61-62  4. 讨论  62-63  5. 结论  63-64参考文献  64-68附录  68-71致谢  71-72综述  72-81  参考文献  79-81

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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