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中国明对虾卵黄蛋白原的cDNA克隆及表达特征研究

作　者: 孙丽娜
导　师: 谢松
学　校: 河北大学
专　业: 水生生物学
关键词: 中国明对虾卵黄蛋白原 cDNA 克隆表达
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

卵黄蛋白原(Vitellogenin，Vg)是卵黄蛋白(vitellin，Vn)的前体。脊椎动物和昆虫的Vg分子得到了广泛研究，但对虾Vg基因的研究报道相对较少。中国明对虾是我国重要的经济养殖品种。本文通过同源克隆和RACE等方法从成熟中国明对虾卵巢中克隆到了一条Vg cDNA序列。全长7956 bp，含有一个7761 bp的开放阅读框(ORF)，编码2587个氨基酸残基。推导的氨基酸序列与其他已知甲壳动物Vg具有80—95％的相似性(identity)，序列比对和聚类分析表明中国明对虾Vg与墨吉明对虾Vg氨基酸序列相似性最高(95％)。SingalP程序预测Vg前体N末端含有18个氨基酸残基的信号肽。其余2569个氨基酸中含有一个RXR分裂位点，此位点能被枯草杆菌样蛋白内切酶(subtilisin-like endoproteases)所识别并裂解。推导的Vg理论分子量是281823u，理论等电点pI为6.13，是一种酸性蛋白，带正电荷氨基酸残基(Arg+Lys)总数283，带负电荷氨基酸残基(Asp+Glu)总数为311。氨基酸含量分析显示，Vg蛋白含有较多的Ala(11.56％)、Glu(8.99％)、Val(8.52％)和Ile(7.12％)。RT-PCR方法检测到Vg基因同时存在于雌性和雄性对虾基因组中，但其转录只发生在卵黄形成期的雌性对虾的卵巢和肝胰腺中。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第1章绪论  8-21
  1.1 研究进展  8-19
    1.1.1 卵黄蛋白和卵黄蛋白原的性质研究进展  8-9
    1.1.2 卵黄蛋白原基因分子克隆的研究进展  9-16
      1.1.2.1 昆虫卵黄蛋白原基因克隆的研究进展  9-12
      1.1.2.2 脊椎动物Vg基因研究进展  12-14
      1.1.2.3 甲壳动物卵黄蛋白原基因分子克隆的研究进展  14-16
    1.1.3 甲壳动物卵黄蛋白原基因的表达研究进展  16-19
  1.2 研究目的  19
  1.3 研究意义  19-21
第2章中国明对虾卵黄蛋白原cDNA的克隆和序列分析  21-58
  2.1 引言  21
  2.2 材料与方法  21-29
    2.2.1 材料  21
    2.2.2 仪器与试剂  21-23
    2.2.3 方法  23-29
      2.2.3.1 引物设计  23-24
      2.2.3.2 卵黄蛋白原cDNA中间片段的克隆  24-27
      2.2.3.3 卵黄蛋白原cDNA 3′—RACE和5′—RACE  27-28
      2.2.3.4 序列分析  28-29
  2.3 结果  29-54
    2.3.1 卵巢总RNA的提取  29
    2.3.2 卵黄蛋白原cDNA中间片段扩增结果  29-30
    2.3.3 卵黄蛋白原cDNA 3′—RACE和5′—RACE  30-31
    2.3.4 中国明对虾卵黄蛋白原cDNA全序列及分析  31-41
    2.3.5 中国明对虾Vg的分子系统进化分析  41-54
  2.4 讨论  54-58
第3章中国明对虾卵黄蛋白原基因表达特征的初步研究  58-65
  3.1 引言  58
  3.2 卵黄蛋白原基因表达特征的研究  58-61
    3.2.1 材料  58-59
    3.2.2 仪器与试剂  59
    3.2.3 方法  59-61
      3.2.3.1 引物设计  59
      3.2.3.2 中国明对虾雌雄肌肉基因组DNA的提取  59-60
      3.2.3.3 PCR扩增雌雄虾的卵黄蛋白原基因片段  60
      3.2.3.4 中国明对虾成熟雌虾各组织总RNA的提取  60-61
      3.2.3.5 RT-PCR  61
  3.3 结果  61-63
  3.4 讨论  63-65
第4章结语  65-67
参考文献  67-74
致谢  74

中国明对虾卵黄蛋白原的cDNA克隆及表达特征研究

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