肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡作用以及其作用机制是否涉及耗竭细胞谷胱甘肽(glutathione, GSH)。方法体外培养人胃癌BGC-82" />
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芹菜素和TRAIL联合应用对人胃癌细胞凋亡的影响

作　者: 蒋迪
导　师: 黄秋林
学　校: 南华大学
专　业: 外科学
关键词: 胃癌 芹菜素 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 增敏作用 凋亡 谷胱甘肽
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的研究芹菜素(apigenin, API)是否具有增强凋亡诱导配体 的学位论文">肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡作用以及其作用机制是否涉及耗竭细胞谷胱甘肽(glutathione, GSH)。方法体外培养人胃癌BGC-823细胞和人永生化胃粘膜GES-1细胞; MTS比色法测定细胞活性;碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色流式细胞术(flow cytometry, FCM)分析细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing aspartate-specific proteases, caspase-3)活性;分光光度法(spectrophotometry)检测细胞内GSH含量;异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记死亡受体-5(Death receptor 5, DR5)抗体FCM分析细胞DR5表达水平。结果MTS比色法测定结果显示:单用API (10、20μmol/L)以及单用TRAIL(10.0、100ng/mL)作用24 h,抑制BGC-823细胞活性作用微弱,与溶媒对照组比较差异无统计学显著意义。20μmol/L API预孵育1 h, TRAIL(10、100、1000ng/mL)作用24 h,抑制BGC-823细胞活性作用显著增强(P<0.05),呈浓度依赖性;然而,两者合用对GES-1细胞活性抑制作用微弱。PI染色FCM分析结果表明:单用20.0μmol/L API和100 ng/mL TRAIL以及两者合用处理24 h,BGC-823细胞的凋亡率分别为4.46±0.56%、5.18±0.40%和32.2±3.82%;GES-1细胞的凋亡率分别是4.14±0.23%、4.07±0.23%和4.50±0.32%。ELISA测定细胞caspase-3活性结果发现:在BGC-823细胞系,20.0μmol/L API和100 ng/mL TRAIL合用显著诱导caspase-3激活(P<0.05),caspase-3特异抑制剂(10μmol/L Ac-DEVD-CHO)能有效阻断两者合用诱导caspase-3活化作用(P<0.05);在GES-1细胞系,20.0μmol/L API和100 ng/mL TRAIL无论单用亦或合用对细胞caspase-3活性无明显影响。分光光度法(spectrophotometry)检测细胞内GSH含量结果证明:在20μmol/L～40.0μmol/L浓度范围内,API以浓度依赖方式降低BGC-823细胞内GSH含量(P<0.05);而对GES-1细胞内GSH含量无明显影响。FITC标记抗DR5抗体的FCM分析显示: API(20.0μmol/L、40.0μmol/L)上调BGC-823细胞DR5表达,呈浓度依赖性(P<0.05);在GES-1细胞系中,API无此作用。另外,添加外源性GSH(500μmol/L GSH预孵育1 h )能够有效拮抗API降低BGC-823细胞内GSH含量和上调DR5蛋白表达以及亚毒性API和TRAIL合用抑制细胞活性、诱导细胞凋亡和激活caspase-3作用(P<0.05)。结论1.亚毒性浓度的API具有增强TRAIL诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡作用。2.亚毒性浓度的API与TRAIL合用对永生化人胃粘膜GES-1细胞凋亡影响小。3.细胞内GSH耗竭是亚毒性浓度的API敏化TRAIL诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡作用的主要机制之一。

全文目录


中英文缩略词表  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
前言  10-11
材料与方法  11-16
结果  16-29
讨论  29-34
结论  34-35
参考文献  35-39
综述  39-50
  参考文献  47-50
致谢  50

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