肝细胞生长因子(HGF)、表皮细胞生长因子(EGF)诱导MSCs 向肝细胞定向分化的可行性。方法:用Ficoll 淋巴细胞分离液分离出骨髓中的MSCs,接种于含10%胎牛血清的L-" />

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人骨髓间充质干细胞的体外培养及其向肝细胞诱导分化的实验研究

作　者: 顾丽丽
导　师: 彭贵祖
学　校: 江西医学院
专　业: 外科学
关键词: 骨髓间充质干细胞体外培养诱导分化肝细胞生长因子表皮细胞生长因子肝细胞
分类号: R329.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

目的:建立一种人骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)体外培养方法,探讨肝细胞生长因子的学位论文">肝细胞生长因子(HGF)、表皮细胞生长因子(EGF)诱导MSCs 向肝细胞定向分化的可行性。方法:用Ficoll 淋巴细胞分离液分离出骨髓中的MSCs,接种于含10%胎牛血清的L-DMEM 培养液中进行原代培养,待细胞基本融合后用胰蛋白酶和EDTA 混合液消化传代。在倒置相差显微镜下观察细胞形态,台盼蓝拒染法计数细胞并绘制生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期。取第三代人MSCs 分别在含HGF、EGF、HGF+EGF 以及不含生长因子的无血清肝细胞培养基中诱导培养。在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,于诱导培养的第1、7、14、21、28 天取出细胞爬片,应用免疫细胞化学法分别检测甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)、细胞角蛋白18(CK18)的表达,PAS 法进行糖原染色试验,并收集培养上清液用全自动生化分析仪检测ALB 和BUN的含量。结果:1、采用密度梯度离心结合贴壁培养法可成功分离出人骨髓中的MSCs。刚接种时细胞形态呈圆形、三角形或棒杆状,48h 后细胞开始贴壁,4-5d 可见有集落形成,第7d 形成多个细胞克隆,第10d 细胞呈长梭形,2w 左右可达到基本融合;传代细胞呈均匀的纺锤形,基本上无悬浮细胞。生长曲线呈现生长缓滞期、对数增殖期和生长平稳期的典型特征。流式细胞仪检测显示约有86.4%的细胞处于G0、G1 期。2、接种于含HGF、EGF 和HGF+EGF 无血清肝细胞培养基中的MSCs 于诱导第5 天均可观察到部分纺锤形细胞逐渐变圆,换液的同时诱导孔中细胞数目略有减少;第10 天左右基本

全文目录

一、中文摘要  3-5
二、英文摘要  5-8
三、前言  8-10
四、材料与方法  10-16
五、结果  16-21
六、讨论  21-26
七、结论  26-27
八、参考文献  27-32
九、致谢  32-33
十、附图  33-38
十一、综述  38-44

人骨髓间充质干细胞的体外培养及其向肝细胞诱导分化的实验研究

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