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山羊印记基因H19、Dlk1、CLPG和毛囊发育相关基因Dkk1的研究

作　者: 曹贵玲
导　师: 姜运良；王建民
学　校: 山东农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 山羊基因组印记 H19 Dlk1 CLPG Dkk1 产绒量
分类号: S827
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

本研究可以分两个部分:第一部分:基因组印记是一种依赖于亲本的基因表达形式,导致功能基因单一表达一个等位基因而不表达另一个等位基因,造成印记位点的单等位表达,是一种基因表达的正常形式。虽然印记基因在哺乳动物基因组中只占一小部分,但在胚胎生长和行为发育中都起了关键作用。人和小鼠的H19和Dlk1是印记基因,但是山羊的H19和Dlk1的基因序列、基因结构和印记状态还不清楚。2002年,Freking等人发现一个位于Gtl2上游32.8kb的A-G的单碱基突变称CLPG突变。该突变可能是导致Callipyge绵羊表型的主要原因。山羊中是否也存在这样的突变,导致“肥臀山羊”成为本研究的一部分。试验一:克隆了山羊H19部分序列,得到了1139bp的序列,该序列和绵羊、牛的同源性很高,分别为96.22%和90.51%,和猪、人、小鼠的同源性较低,分别为72.06%、59.64%和51.83%。检测了山羊胎儿和成年组织中H19的表达情况。H19在胎儿的大多数组织表达,出生后的表达在有些组织中受到限制,在成年山羊中在肝脏、肺、胰脏、背最长肌、脾脏和肾脏中检测到H19转录物。在H19外显子5上找到一个SNP,通过检测杂合子基因型和转录物及其父母基因型,发现H19在成年山羊组织中是父本印记表达。试验二:克隆了山羊Dlk1部分cDNA序列,得到864bp,编码287个氨基酸残基,山羊Dlk1 cDNA和氨基酸序列与其他哺乳动物的相应序列有很高的同源性。Dlk1在胎儿大多数组织中表达,只在成年组织中的胰脏、胸腺和肾上腺表达。通过外显子5上一个SNP,发现Dlk1在成年上述三种组织中都是父本表达,是一个母本印记基因。另外Dlk1在山羊成年组织中只存在两种剪接变体Dlk1-C和Dlk1-C2。试验三:克隆了山羊CLPG区250bp的片段,该片段和绵羊、猪的相应片段有很高的同源性。用PCR-SSCP方法对波尔山羊、莱芜黑山羊、鲁波山羊、鲁北白山羊和白绒山羊进行检测,在“CLPG”突变处没有发现A→G突变,在CLPG突变下游147bp处发现一个A→C的突变,称A216C位点,用PCR-RFLP方法检测了上述5个山羊品种,其中鲁波山羊群体中A等位基因频率最高,鲁北白山羊群体中A等位基因频率最低,前四个群体中该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),白绒山羊群体偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.01)。产绒量、出生重、断奶增重等性状在该位点不同基因型之间差异不显著。第二部分:Dkk1是Dkk家族成员之一,是Wnt信号途径的拮抗物,参与多种生命过程。Dkk1可能通过抑制Wnt信号途径参与毛囊密度的控制。本研究旨在寻找新的和山羊毛囊密度相关的基因,了解其作用机制,期望能够用于提高山羊绒产量的分子育种。克隆了山羊Dkk1基因,获得3491bp序列,预测其mRNA和氨基酸序列,其mRNA和氨基酸序列和其他哺乳动物的相应序列有很高的同源性。在白绒山羊群体中对3491bp序列进行了SNP扫描,发现33处单核苷酸替代,内含子2中一处4碱基插入。外显子1中发现一处错义突变,命名为T1108P。检测了T1108P位点在白绒山羊群体中的分布,结果显示该位点在白绒山羊群体中没有多态性。启动子区有一个T-C颠换和C-A转换,二者间距9bp,命名为T593C-C603A,检测了这两个位点在白绒山羊中的基因型频率和基因频率;统计显示,产绒量、单位体表面积产绒量、出生重、断奶增重等性状在T593C位点不同基因型之间差异不显著。

全文目录

中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
文献综述  12-31
  第一部分基因组印记及H19、Dlk1 和CLPG  12-27
    1 基因组印记  12-19
    2 H19 基因的研究现状  19-22
    3 Dlk1 的研究现状  22-25
    4 CLPG 的研究现状  25-27
  第二部分毛囊相关基因Dkk1 的研究进展  27-31
    1 Dkk1 的研究进展  27-29
    2 山羊绒简介  29-31
材料与方法  31-38
  1 试验材料  31-32
  2 实验方法  32-38
第一部分山羊印记基因H19、Dlk1、CLPG 的研究  38-66
  试验一山羊H19 基因的克隆、组织表达及印记状态分析  38-47
    1 试验材料  38
    2 实验方法  38-40
    3 结果与分析  40-44
    4 讨论  44-47
  试验二山羊Dlk1 的克隆、组织表达、印记状态分析及可变剪接检测  47-57
    1 试验材料  47
    2 实验方法  47-49
    3 结果与分析  49-54
    4 讨论  54-57
  试验三山羊“CLPG”片段的克隆与检测  57-66
    1 试验材料  57
    2 实验方法  57-60
    3 结果与分析  60-64
    4 讨论  64-66
第二部分毛囊发育相关基因Dkk1 的研究  66-74
  山羊Dkk1 基因的克隆及多态性研究  66-74
    1 试验材料  66
    2 实验方法  66-69
    3 结果与分析  69-73
    4 讨论  73-74
结论  74-75
参考文献  75-82
致谢  82

山羊印记基因H19、Dlk1、CLPG和毛囊发育相关基因Dkk1的研究

内容摘要

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