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DKK1对恶性黑素瘤细胞A375增殖影响的初步研究

作　者: 陈恒君
导　师: 李惠
学　校: 重庆医科大学
专　业: 皮肤病学与性病学
关键词: DKK1 恶性黑素瘤 β-catenin 腺病毒载体
分类号: R739.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 41次
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内容摘要

目的利用DKK1腺病毒质粒,转染人恶性黑素瘤细胞株A375,观察转染后DKK1和β-catenin表达量的变化,研究DKK1高表达对恶性黑素瘤增殖的影响。方法构建DKK1腺病毒(Adenovirus)质粒;实验分为三组:Ⅰ组:Ad-DKK1-GFP转染组(实验组)、Ⅱ组:Ad-GFP转染组(空载腺病毒对照组)、Ⅲ组:空白细胞对照组;转染人恶性黑素瘤细胞株A375,确定DKK1在人恶性黑素瘤细胞株中高表达;RT-PCR检测转染后细胞中β-catenin表达水平的改变;细胞计数检测DKK1对细胞增殖的影响;MTT检测DKK1对细胞活力的影响;建立裸鼠移植瘤模型;对瘤体重量做统计学分析;免疫组化分析瘤体内DKK1和β-catenin表达的变化。结果1.重组腺病毒能有效转染A375细胞,转染效率较高,当MOI为80时,细胞转染效率为80%左右。2.RT-PCR检测结果:转染后的细胞内稳定高表达DKK1,而β-catenin的表达降低。3.细胞计数法检测结果:24H/48H细胞计数结果均显示:实验组与对照组比较增殖受到抑制。4.MTT法检测结果:实验组与对照组比较细胞活力降低。5.瘤体重量分析结果:实验组与对照组比较瘤体重量较轻。6.免疫组化结果:实验组的DKK1表达和对照组比较有增强,而β-catenin的表达减弱。结论1.重组腺病毒在体外能有效转染人恶性黑素瘤细胞株A375,转染效率高。2.转染后细胞能有效表达DKK1,并能抑制β-catenin的表达。3. DKK1在体内外对A375的增殖均有一定的抑制作用。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-10
前言  10-12
第一部分：DKK1 在体外对恶性黑素瘤细胞A375 增殖影响的初步研究  12-30
  1 实验材料  12-14
  2 实验方法  14-22
  3 实验结果  22-26
  4 讨论  26-27
  5 结论  27-28
  附图  28-30
第二部分：DKK1 在体内对恶性黑素瘤细胞A375 增殖影响的初步研究  30-40
  1 实验材料  30-32
  2 实验方法  32-35
  3 实验结果  35-37
  4 讨论  37-38
  5 结论  38-39
  附图  39-40
全文总结  40-41
参考文献  41-44
文献综述  44-52
致谢  52-53
攻读学位期间发表的学术论文  53

DKK1对恶性黑素瘤细胞A375增殖影响的初步研究

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